海洋碳样小单孢菌产生的异黄酮类化合物——染料木素和大豆黄素研究.pdfVIP

福建覆n。 第三届海洋生物高技术±幺坛 2005．08．19-23 海洋碳样小单孢菌产生的异黄酮类化合物 一染料木素和大豆黄素+ 江红+林如谢阳聂毅磊郑卫程元荣 (福建省微生物研究所，福州350007) 摘要：从海洋小单孢菌中筛选新免疫抑制剂的过程中，获得一株海洋小单孢菌FIM02—635，经 carbonacea 02．635的发酵液中获得两种具有免 分类属碳样小单孢茵。Micromonosporasp．HM 疫抑制的活性物质FW63511和FW63512。经理化性质研究、化学结构鉴定及生物学活性测定 证明它们分别与大豆黄素(daidzein)和染料木素(genistein)质。 关键词：小单孢菌；异黄酮；免疫抑制；抗肿瘤 免疫抑制剂是器官移植抗排斥和自身免疫性疾病的治疗药物，应用于临床的选择性免疫 抑制剂生要为微生物来源但品种有限，有的还有较大的副作用。因此寻找新型、强效、低毒 I杓选择性免疫抑制剂是Ij=I：界同行关注的热点。相比较砥斋海洋微生物是筛选新生理活性物质 的重要新来源之一。我们在筛选新免疫抑制剂的过程中，发现一株海洋小单孢菌 02．635的发酵菌丝提取物具有免疫抑制活性并提取到两个异黄酮类 Micromonosporasp．FIM 化合物。本文对产生菌进行分类鉴定，对其进行发酵、代谢产物分离和结构分析以及化合物 的体外生物学活性进行报道。 1材料与方法 I M 1．1小单孢菌Micromonosporasp．F02-635的分类学研究 保存菌株HM02—635的斜面培养物划线于高氏琼脂平板，在平板表面斜插无菌盖玻片， 30℃培养，分别=：j二5、10、20d取出盖玻片用光学显微镜观察。电子显微镜下观察孢子形态及 外观。 培养特征采用国际链霉菌计划川推荐的培养基进行培养特征描述。颜色的描述采用科 学出版社1957年出版的《色谱》【2】。 菌种的生理生化性质采用《放线菌的分类和鉴定》【3】中所用的方法。碳源利用试验以无碳 察结果。 磷酸类脂，枝菌酸和甲基萘醌的测定参照《放线菌的分类和鉴定》和《放线菌研究及应 用》巴DNA的G+Cm01％J毋J定参照De Ley[61等的Tm值方法。 测试菌株的16SrDNA序列分析： 收集待测菌株新鲜菌体，用溶菌酶法【7】提取总DNA模板。采用通用引物进行16SrDNA的PCR +海洋863资助课题，编1I=1-2002AA629170， 木通讯作者Email：jianghon9709@sina．corn 253 疆毽甄n。 第三届海洋生物高技术论坛 200s。08．19-23 Terminator Kit测序，电泳及 DyeDeoxy CycleSequencing 扩增，PCR产物经纯化后直接用Taq DNA rDNA序 BiosystemsSequencer(model377)自动进行。将所测的16S 数据分析由Applied 列与GenBank数据库中已有序列比对，进行同源性分析。 I M 1．2／4／cromonosporasp．F 02-635的培养发酵 一铂环的Micromonosporasp．FIM02—635高氏天冬素斜面培养物接入液体种子培养基(可 溶性淀粉1．5％，葡萄糖0．5％，蛋白胨0．5％，酵母粉0．5％，(NH4)2S040．05％，K2HP04·3H20 0．