海洋蜡状芽孢杆菌041381菌株所产抗真菌活性物质的分离纯化及生物活性研讨.pdfVIP

疆建覆n 第三届海洋生物膏技术论坛 200s．08．19-23 海洋蜡状芽孢杆菌041381菌株所产抗真菌活性 物质的分离纯化及生物活性研究 张鹏洪葵1庄令林海鹏 (中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室， 海口571101) cereus 摘要：拮抗菌Bacillus041381菌株在淀粉液体培养基中产生的蛋白质经硫酸铵分级 G．50柱层析后，分离纯化得到的抗菌蛋白在 A．25柱层析、Sephadex 盐析、DEAE—Sephadex 电泳中显现出一条带。初步确定其分子量为2．5KD；所得活性物质对黑曲霉，米曲霉，稻瘟霉， Smmc一721，K一562的毒性检测，不 弯孢霉等丝状真菌不具有抗性；对细胞B16，Hela， 具有细胞毒性。 关键词：蜡状芽孢杆菌抗真菌蛋白 纯化 自从1955年第一个抗真菌抗生素两性霉素问世以来，抗真菌化学治疗取得了较大的进 展。但近年来随着抗生素、皮质类固醇激素和免疫抑制剂的大量应用，器官移植、导管技术 的发展和肿瘤、免疫抑制病人的增加，深部真菌病的报道日益增多，且根治非常困难…。深 部真菌感染多发生于免疫缺陷患者，如恶性肿瘤、血液病、艾滋病等患者，造成深部真菌感 染的死亡率明显高于其它感染。 当前的抗真菌药中，以合成和半合成的为主，但从海洋微生物的代谢产物中发掘新结构 的化合物也是抗真菌药物的一个重要的发展方向，从中已得到一些显示出有较好活性的抗真 菌物质。 Haliangicin【21是第一个从海洋黏细菌中分离的含D．甲氧基丙烯酸酯、能很好地抑制真菌 生长的新多不饱和化合物，其作用机理是其中的B一甲氧基丙烯酸酯能特定地抑制真菌呼吸链 复合物III的电子传递，抑制真菌的IC50为O．94 ng／mL，很有进一步发展的潜力。15G256r，6 和￡是从中国深圳贬热带海洋红树林中位于潮问带的红树树干上的真菌(Hypoxylon oceanium)代谢物中分离的新颖大环酯肽类物质，均有广谱的抗真菌活性。实验证明，它们 不是通过抑制几丁质合成酶和葡聚糖合成酶，而是通过抑制真菌细胞壁的合成过程中的另外 marine)产生的具有独特结构的物质，显 海120m深的底泥中分离出的新种真菌(Zopfiella 作者简介：张鹏华南热带农业大学热带生物技术研究所在读硕士研究生，国家高科技发展计划(863)海 k1022@163．net 374 福建覆n‘ 第三届蠢洋生物膏技术论坛 200s．08。19．23 示出对真菌，尤其是白色假丝酵母的很强的活性。 在本研究的前期抗真菌活性海洋微生物筛选中，获得一株海洋蜡状芽孢杆菌041381菌 株，该菌能在好氧条件下合成一种抗白色念珠菌的活性蛋白。本研究进行该抗真菌活性蛋白 的分离、纯化及生物活性研究。 1材料与方法 1．1菌株及其来源蜡状芽孢杆菌(Bacillus oryzae)；稻瘟霉(Pyriculariagrisea)； albicans)；黑曲霉(Asperginusniger)米曲霉(Asperginus 弯孢霉(Aurvulariasp)：均由本实验室保藏。 YPD培养基【7】：用于白色念珠菌培养。 1．3抗真菌活性检测方法 琼脂挖块法‘81和美蓝．酶标仪法‘91。 1．4蛋白浓度测定方法Bradford法¨…。 mL液体淀粉 1．5菌株041381产活性物质的制备种子液的制备：以1％的量接入装有100 培养基的500mL锥形瓶中，28。C下，静止，培养18h，获得种子液；以淀粉培养基为发酵