肠道病毒71基因多态性变异与小儿中枢神经系统感染的关系.docVIP

精品论文 参考文献 肠道病毒71基因多态性变异与小儿中枢神经系统感染的关系 1胶州市人民医院儿内科 266300；2 胶州市人民医院 266300；3青岛大学医学院附属医院儿内科 266003 摘要：目的：研究IL-17F基因多态性变异，HLA-A27表型与肠道病毒71型（EV71）感染遗传易感性的关系，探讨不同的基因表型变异对EV71感染患病率风险的影响。方法：收集2011年11月-2013年11月EV71检测为阳性的急性期中枢神经系统感染患儿123例，根据病情轻重分成轻症组、重症组；提取患儿外周血白细胞的基因组DNA，用序列特意性引物-聚合酶链反应（PCR-SSP）技术检测EV71感染患儿及正常对照儿童HLA-A27表型的多态性和限制性片段长度多态性一聚合酶链反应（PCR—RFLP）检测IL-17F 7488T/C位点的多态性。结果EV71感染患儿中HLA—A27表型阳性率（24．39％）与健康儿童组阳性率（11．82％）的差异有统计学意义（X2=6，099，Plt;0，05）。EV71中枢感染患儿位点IL-17F 7488T/C等位基因频率明显高于正常对照组（x2=6．367，Plt;0.05），感染组IL-17F 7488TT基因型分布频率显著低于正常对照儿童（X2=5．393，Plt;0．05）；而轻症组与重症组相比，其差异无统计学意义（Pgt;0．05）。HLA—A27（+）患儿中，EV71感染组IL-17F 7488T/C基因型频率明显高于正常对照组（X2=3．866，Plt;0．05），而在HLA．A27（一）儿童中，其差异无统计学意义。结论 HLA-A27表型、IL-17F 7488T/C位点基因多态性与EV71中枢感染有关。 关键词：肠道病毒71；HLA抗原；IL-17F多态性 肠道病毒71型是儿童手足口病、中枢神经系统、循环系统感染的主要病原菌。与肠道病毒家族的其他成员相比，EV71有较强的嗜血、嗜神经性，更易引起中枢神经系统损伤，严重患儿可出现肺水肿、心包积液而导致死亡。研究发现HLA—A27基因的表型与EV71感染有非常重要的相关性。IL-17F能够促进其他炎症因子及趋化因子（IL-6，CXCL10）的释放，使炎症反应进一步扩大，IL-17F 7488T/C（rs763780）位点具有基因多态性，且与多种疾病具有相关性，但对于IL-17F 7488T/C位点基因多态性与EV71感染相关性研究也有报道。IL-17F参与免疫应答过程白细胞和中粒细胞的生成及转移过程IL-17可引起CRP升高，IL-17F与IL-17具50%同源性，且多于二聚体的形式参与炎症反应，故推测IL-17F也可导致CRP升高。IL-17F7488T/C位点Trarr;C的基因变异降低了EV71脑炎的患病风险，C等位基因是保护基因，而TT基因型、T等位基因是EV71脑炎的遗传易感因素。 对象与方法 一、研究对象 收集2011年11月-2013年11月，在青岛大学医学院附属医院、青岛市儿童医院、胶州市人民医院和滨州市人民医院住院的中枢神经系统感染的患儿123例，平均年龄1．3—6．7岁，其中无菌性脑膜炎83例，脑炎40例，均符合《实用儿科学》的诊断标准，且经RT—PCR定性法检测粪便及脑脊液EV71病毒核酸均为阳性。根据病情轻重分成轻症组、重症组，重症组符合下列条件2项或以上：（1）频繁抽搐或惊厥持续状态；（2）意识障碍，Glasgow昏迷评分lt;7分；（3）瘫痪；（4）出现脑干症状；（5）脑cT或MRI显示脑实质和（或）脑干内异常密度灶。入院时采集病儿静脉EDTA抗凝血2 ml，于一20℃短暂保存备用，所有标本采集时间均在病程前3 d内。正常对照组110例，为同时期健康体检儿童，临床无感染症状，年龄2.6—7．5岁，血常规及生化指标检查均在正常参考范围内。 二 方法 1、标本基因组DNA的制备；采用天根公司全血DNA提取试剂盒，按试剂盒造作说明自抗凝全血中提取人基因组DNA. 2、HLA-A27表型基因检测；参照Bunce等的报道设计扩增HLA-A27特异性引物。由上海生工生物技术有限公司合成。PCR扩增使用宝生物公司的PremixExTaq，参照试剂盒说明操作。HLA-A27表型扩增条件；950C预变性3min，950C 30S，610C 30S，720C 20S，35个循环；最后720C 10min。扩增产物立即在琼脂糖凝胶上电泳检测。 3、IL-17F引物设计 EV71特异引物 5prime;-ATGCGTAGAAAGGTGGAGCT-3prime;（341bp） 5prime;-CGCATGTC