冷诱导基因的转录因子CBF1转化紫羊茅及耐寒性鉴定研究.pdfVIP

中国草学会草坪专业委员会学术研讨会论文与摘要集 冷诱导基因的转录因子CBFl转化紫羊茅及 耐寒性鉴定 贾炜珑1～，胡鸢雷2，张彦芹3，杨丽莉3，林忠平2，吴镝2，倪挺2 1天津大学理学院，天津p∞0722；2，北京大学生命科学学院，北京，1008713；3山西省农业科学院早地农业研究中心太原,030031 摘要：本研究构建了ub／qut／n启动子驱动下的CBFl基因的表达载体．以bar基因为筛选标记基因， 用基因枪法将CBFl基因转入紫羊茅．经PCR：令gq／g．southern杂交鉴定表明，CBFI基因已整合到 紫羊茅的基因组中．以转基因紫羊茅为材料，用电解质渗漏法研究了其在不同低温下的耐寒性， 结果表明，CBFI转基因紫羊茅的耐寒能力明显增强，半致死温度}匕对照提高一3至一6度． 关键词：CBFl基因转基因紫羊茅、耐寒性半致死温度 ’紫羊茅(FestucarubraL)为具优良观赏性，且应用甚广的一种草坪植物。然而在寒 温带地区，它在冬季的绿期偏短。通过基因工程提高耐旱性和耐寒性具有实际应用价值。关 161建立了轻匍匐紫羊茅的悬浮培养物再生 于紫羊茅的遗传转化的研究，自1989年Zaghmout 植株培养体系以来，后相继又由原生质体71、种子愈伤[31建立了再生体系。国外已有个别紫 羊茅的遗传转化的研究报道【8H121。但未见抗逆性基因转入紫羊茅提高耐寒性和抗旱性的报 道。DREB转录因子由逆环境胁迫诱导产生后，可激活其他一些依赖DRE顺式作用元件的抗 逆功能基因，引起脯氨酸及蔗糖含量提高从而增强植株对多种逆境(旱、冻及盐)的抵抗性。 将来自拟南芥的编码EREBP／AP2．型转录因子的CBFl基因转入植物，获得抗逆性提高的植 物已有一些报导[1，2，3，4，51。我们在建立了紫羊茅的高效转基因技术体系的基础上1131， 构建了ubiqutin启动子驱动的CBFl基因的单子叶植物表达载体，转入紫羊茅，并研究了转 基因紫羊茅的耐寒性。 l材料与方法 1．1材料的准备：紫羊茅(Festucarubra工)，品种为派尼。购自山西省种子公司。以紫羊 茅的成熟种子为外植体，种子先浸泡在75％乙醇中2分，再转入0．1％HgCl2中20-30分，无 菌水洗3-5次后先接种在MS基本培养基上培养3天，然后转入MS培养基中附加 伤组织。在28℃暗培养2个月可形成愈伤组织。愈伤组织每4周用新鲜的MSA培养基继代， 继续培养3．5个月，就可形成胚性愈伤组织用于基因转化。转化前将胚性愈伤组织置于含有 山梨醇及甘露醇各45．6 g的MSB高渗培养基上处理4石小时后用于基因枪转化。高渗培养 基中不含有L脯氨酸。高压灭菌前用1M的NaOH将培养基的PH调到5．6-5．8。 1．2单子叶植物表达载体的构建 和5LGAA Factor)从拟南芥基因组 ACGAC玢1℃GA加Ⅺ髓G习’CBFl(C-repeat-_Binding 基金项目：国家“863”项目“草类转基因技术研究“(2001AA212161)和“韩草生物技术育种”(2002AA2122)资助 作者简介：贾炜珑(1959--)．女。山西太原人·副研·大学t E-mail：jitwl2003@yahoo．com．ca 草种资源与园林植物 启动子和CBFl基因的融合片段(2．9kb)，将它与Hind 收的大片段连接，得到ubiqutin启动子驱动CBFl基因的植物表达载体p3ubiCBFl。 1．3紫羊茅的转化与再生植株的获得： 紫羊茅的基因转化用基因枪法，用BioRad公司生产的PDS．1000／He型基因枪。子弹制 2．5mol／L CaCl2、20#l 备：5叫金粉悬液(60mg／m1)中加入靴l质粒DNA(珈g似1)、50／,l