实验5环境因素对微生物生长发育.pptVIP

* * 实验五 环境因素对微生物生长发育的影响 实验目的 1.紫外线杀菌实验 了解物理、化学及生物因素抑制或杀死微生物的 作用及其实验方法。 实验内容 2.化学消毒剂、抗生素抑菌实验 3.生物因素对微生物的影响 UV的波长范围为136～390nm， 其中200～300nm波长范围的紫外线具有杀菌效应； 紫外线杀菌主要是形成嘧啶二聚体，最常见的是胸腺嘧啶二聚体，相邻碱基间引起DNA螺旋的扭曲畸变，导致细菌的死亡。 波长254nm的UV最易被嘌呤和嘧啶碱基吸收，因而杀菌效果最强； 实验原理 紫外线透过物质能力差，只适用于空气及物体表面的灭菌。紫外线对于人体有伤害作用。人不能直视开着的紫外灯，更不能在开着紫外灯的情况下工作。可见光能使形成的二聚体拆开复原，不能在开着钨丝灯及日光灯情况下开紫外灯灭菌。 实验中常用波长为254nm的15W紫外灯管，照射距离不超过3m。 照射时间为 15-30min。 化学消毒剂是通过使菌体蛋白质变性或是与酶的-SH结合使酶失活而发挥杀菌或抑菌作用。 5%苯酚使蛋白质变性；75%乙醇使蛋白质脱水变性；0.05%龙胆紫中带正电荷基团与蛋白质的羧基结合；新洁尔灭作为阳离子型表面活性剂吸附在菌体细胞表面使其损伤；37%-40%甲醛水溶液与蛋白质氨基结合。 2.5%碘液的作用是碘不可逆地与菌体蛋白络氨酸结合； 产黄青霉分泌青霉素抑制细菌细胞壁的合成，机理是青霉素与肽聚糖D-丙氨酰-D-丙氨酸结构类似，青霉素竞争与转肽酶结合形成青霉素转肽酶复合物，从而破坏细胞壁完整网状结构。 链霉素作用于细菌核糖体30S亚基，抑制细菌蛋白质 的合成。 生物拮抗的突出特点是具有选择性。 五、实验步骤 1.紫外线杀菌实验： 取100 ul培养至对数期的金黄色葡萄球菌液均匀涂布在肉汤蛋白胨固体平板上，用一三角形黑纸条遮住部分平板，打开皿盖，置紫外灯下照射30min后，弃去黑制片，盖上皿盖，置37℃培养箱培养24h后观察结果 。 （1）吸取200 ul培养18 h的葡萄球菌菌液于无菌培养皿内。 （2）将冷却至50℃左右的肉汤蛋白胨琼脂培养基倒于装有菌液的培养皿内立即摇匀，待凝。 2.化学因素的影响 （3）用无菌镊子将浸有不同化学药剂的小滤纸片 按一定位置贴到培养基表面（注意：标明药物名称）。 （4）将贴好滤纸片的瓶皿置37℃室温培养24 h后， 观察比较抑制菌圈大小 *