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微生物学实验- 08生物科学;实验一、实验室环境和人体表面微生物的检查 ;三、器材 l．培养基???肉膏蛋白胨琼脂平板（每人一个）。 2．仪器或其他用具???无菌水，灭菌棉签(装在试管内)，试管架，酒精灯，记号笔，废物缸。 四、操作步骤l．标记任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源(如实验室空气或无菌室空气或头发等)，字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。;人体表面微生物的检查 手指：在火焰旁，半开皿盖，用洗前的手指在平板的A区轻按一下，迅速盖上皿盖。然后用肥皂洗手2次，自然干燥后，在B区轻轻按一下，迅速盖上皿盖。 头发：将1~2根头发轻轻放在平板的C区，迅速盖上皿盖。 鼻腔：取出棉签，并将其弄湿。用湿棉签在鼻腔内滚动数次。立即在平板的D区轻轻摩擦2~3次，迅速盖上皿盖。 并将用过的棉签放回试管中。;实验室环境的检查 空气???将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。lh后盖上两个皿盖。（老师做） 实验台：E 门的旋钮:F 灰尘:H 无菌水:G 培养：将所有平板翻转、使皿底朝上，37℃培养1~2d。;结果与讨论 用P8 表Ⅰ-1记录结果 思考题 P8 1~4 ;结果与讨论 思考题 P20 1、5、10;实验三、消毒(disinfection)与灭菌(sterilization);;结果与讨论 思考题 P27 1、5、9、11;实验四、平板分离技术与活菌技术;实验步骤 稀释涂布平板法 倒平板（20个/组），取其中9个，贴好标签。 采土样：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~25cm深度的土壤数10g,装入已灭菌的牛皮纸袋,封好袋口,带回实验室。 制备土壤稀释液：称取土样10g， 在酒精灯火焰旁，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，摇20min。 梯度稀释，制取土壤菌悬液10-1 、 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6 6个梯度。 涂布：取10-4、10-5、10-6三个梯度的菌悬液，用移液枪取每个梯度0.1ml于平皿中，用玻璃涂棒涂布，每个梯度作3个平行，室温静置5~10min。 培养：37℃倒置培养，24h。观察实验结果，并记录菌落数。周四;操作步骤;平板划线分离法 用接种环挑取上述的土壤菌悬液一环在平皿上划线平皿中的单个菌落，取平板1个（每人1个）从平皿中挑取单个菌落，于平皿中，每组同学接2个斜面。 37℃培养，24h。 从上述培养的15个平皿中，用接种环挑取单个菌落，用划线分离法，转接至新的平皿中（5个），贴好标签， 37℃倒置培养，24h。周四 观察平皿当中菌落的分离情况，用接种环挑取平皿中的单个菌落于斜面中，贴好标签， 37℃倒置培养，24h。周五;注意事项： 梯度稀释：菌悬液必须摇匀 移液枪的使用：调刻度、取样、去除枪头 涂布操作 实验结果与讨论 P34 表Ⅱ-5 思考题 P1.2.3;实验五、含甘油培养物保藏法;实验材料 菌种：上次实验分离的各种菌种 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 其他物品：酒精灯、无菌水、接种环、移液枪、枪头、镊子、1.5mlEP管、EP管架等 实验步骤 甘油灭菌：将15%的甘油置于100ml小锥形瓶内，每瓶装50ml，塞上棉塞，高压蒸汽灭菌，0.1MPa灭菌20min。 接种与培养：将划线分离获得的斜面37 ℃，培养，待用。 培养物与灭菌甘油混合：无菌操作，用移液枪吸取15%的甘油于斜面中，震荡，摇匀，获得培养物与灭菌甘油混合液。 保藏：用无菌的镊子取一支EP管，用移液枪吸取1.0ml的混合液于EP管中，贴好标签。于-20℃的冰柜中进行保存。;实验结果与讨论 列表比较斜面法、液体石蜡法、穿刺法、砂土管法、冷冻干燥法各适合保藏何种类型微生物？保藏温度及保藏时间。 思考题 实验室中最常用那一种既简单又方便的保藏法保藏菌体？它由那些优缺点？;实验三、普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色;实验三、普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色;简单染色 这是最基本的染色方法，由于细菌在中性环境中一般带负电荷，所以通过采用一种碱性染料如美兰、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等进行染色。这类染料解离后，染料离子带正电荷，故使细菌着色。 实验材料 菌种：枯草芽孢杆菌（B.subtillus） 染液：草酸铵结晶紫染液、碱性复红等 其他物品：无菌水、显微镜、载片、滤纸、香柏油、乙醇乙醚混合液、擦镜纸、接种环;实验步骤 涂片→干燥→固定(在微火上通过3—4次)→染色（染色1min）→冲洗→吸干