生物化学课件第十二章 DNA的生物合成.ppt

DNA;DNA的生物合成 DNA Biosynthesis;DNA的生物合成：细胞内合成DNA的过程 1、复制：以DNA作为模板指导的DNA合成，即将DNA携带的信息传至子代DNA。 2、 反转录：DNA合成也可以RNA为模扳指导合成作用，见于RNA病毒。 3、修复合成：当各种因素引起DNA损伤时，损伤DNA可修复合成，校正错误，完成正确合成，以保持DNA结构 的稳定性和遗传信息的准确性。 ;染色体DNA的复制 ;复制(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。;一、复制方式：半保留复制;密度梯度实验 ;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;二、参与DNA复制的物质 ;1、复制的化学反应 ;聚合反应的特点;2、DNA聚合酶;5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | |;功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。;323个氨基酸;DNA-pol Ⅱ（120kD）;功能 是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。 ;原核生物的DNA聚合酶;真核生物的DNA聚合酶;1. 遵守严格的碱基配对规律； 2. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 3. 复制出错时DNA-pol的及时校读功能。;3、解螺旋酶、引物酶和单链DNA结合蛋白;解螺旋酶(helicase) ——利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链 引物酶(primase) ——复制起始时催化生成RNA引物的酶 单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) ——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整 ;10;解链过程中正超螺旋的形成;拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;;4、DNA连接酶;HO;DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。;基本过程：原核3个阶段（起始、延长、终止），真核4个阶段（起始、延长、终止、末端复制） ;E.coli复制起始点 oriC;原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 ;A. 环状双链DNA及复制起始点 B. 复制中的两个复制叉 C. 复制接近终止点(termination, ter);真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 ;5’; Dna A;3?;（二）复制的延长; 5;3?;顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。 另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为岡崎片段(okazaki fragment)。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 ;领头链的合成;;;阶段一;阶段三;复制过程简图;原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。;5?;;哺乳动物的细胞周期;? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ? 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 ;3?;染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。;端粒(telomere);端粒酶(telomerase);端粒酶的催化延长作用;DNA聚合酶复制子链;1、螺旋松弛与解链：拓扑异构酶（TopoⅠ、Ⅱ）、解链酶（解螺旋酶）、单链结合蛋白（SSB） 2种起始方式：复制叉式复制与滚环式复制；多数为定点双向（双叉）复制 原核生物一般只有1个复制