第06章 方法与试剂盒.ppt

第六章 临床 生物化学检验的方法与试剂盒 ;目　录 ;第一节　 临床生物化学检验方法与标准物质 ;　　;2.选择反应条件;（1）选择合适的测定波长 ;精密度是规定条件下独立测定结果之间的符合程度. 精密度的评价采用重复性试验 ;全国临床检验操作规程（第三版）给出了美国国会1988年临床实验室修正案（clinical laboratory improvement amendment，CLIA′88）推荐的常规化学分析项目的允许误差（EA）（表6-1） 一般情况下， EA是CLIA′88推荐的可接受性能的1/4，不同的医学决定水平（Xc）有不同的EA;表6-1　 CLIA′88推荐的允许误差(部分);1.96s ≤EA，可以初步接受，进一步判断见后述的方法性能判断。 其依据是95 %的随机误差值为1.96 s 。 ;1.评价前准备 ①对于评价对象和评价方案均应熟悉。 ②试验用试剂应是同批次配制，或同一批号的商品试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的工作状态。;式中 I = 总天数（20） = 第 i天第1批测定的平均值 = 第 i天第2批测定的平均值 A＝批间变异估计值;式中 =第 i天全部测定的平均值=测定总均值 B=天间变异估计值 ;式中: Srr＝批间标准差; Sdd＝天间标准差;二、准确度评价;回归方程的计算：;三、线性评价;线性范围（linear range）指检测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范围。 测量范围（measuring range，分析范围）指在允许误差极限内所能检测的被测物浓度范围。 ;常规方法应具有较宽的分析范围，至少应包含95％的临床样本，包括临床可能出现的高值。 太窄后容易导致系统误差。;评价前必须： ①熟悉仪器、评价方案和试剂。 ②评价样品的介质应与实际测定的样品相一致，理想的样品是病人的低值或高值样品，这往往不易收集到，亦可用病人的混合样品加入分析物作为高值样品，用正常人样品作为低值样品。低值样品在必要时可作减量处理：如分析物为酶可以加热，小分子化合物可以透析，脂类可用超离心或多价阴离子沉淀。难以收集或处理低值样品时，还可用收集到的高值样品用生理盐水进行系列稀释得到。 ;③线性评价应有至少5个不同浓度 可选择低值和高值样品各一个， 低值样品为1号，高值样品为5号， 二者按体积3：1混匀为2号，等份混匀为3号，1：3混匀为4号，形成系列评价样品。;至少5个不同浓度的样品（X），随机排列，每个样品重复测定4次（Y），因此样品应有足够的量，并且分析要求在当天完成。;样品序号;2. 线性回归分析 b = 1.0002 a = 0.00564 Y = 0.00564 + 1.0002X ;3.组内变异试验 计算各组内变异均方差（SS组内）：;4. 线性失拟误差检查 对非线性误差的估计称为线性失拟误差（lack of fit，LOF），其公式为： LOF＝SS剩 －总SS组内　 其中， ，SS剩即剩余平方和，表示回归后引入的误差估计量。式中的 为回归方程的计算值。 ;四、回收试验;1.方法　将被分析的纯品标准液加入样品中，成为分析样品，原样品加入同量的无分析物的溶液作基础样品，然后用试验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。;2. 回收率计算 回收率为回收量除以分析样品中纯分析物的浓度，公式如下： 　　 Tt：分析样品的测定结果 Tb：基础样品的测定结果 Tt – Tb：回收量 C：分析样品中加入的纯分析物的浓度（加入后浓度） 　　; 　　　式6-14 C0：加入的纯分析物的浓度 V0：加入的纯分析物的体积 TV：总体积;理想的回收率为100%， 如某法测血钙的回收率为95.7%，有－4.3%的比例误差， 表明一个含钙真值为2.5mmol/L的样品，若用该方法测定，约为2.39mmol/L(＝2.5×95.7% )，误差为－0.11mmol/L(＝－2.5×4.3%)。;3. 注意事项 ① 准确吸量，因为被分析物的理论值是根据加入标准液体积及原样品的体积计算所得，吸量稍有不准，就会影响结果； ② 样品中加入标准液后，总的浓度必须在方法的分析范围内，一般须加入高、中、低不同浓度做回收试验，计算平均回收率； ③ 加入标准液后，最好使试验样品的被测浓度达到医学决定水平； ④ 加入标准液的体积一般在10%以内。若稀释过大，误差将发生改变，甚至消失。;五、干扰试验;（一）方法学性能标准 （二）单值判断指标 （三）可信区间判断指标; 　　性能标准（performance standards, PS）也称分析目标, 应根据不同的应用目