第10章微生物与基因工程.ppt

第10章 微生物与基因工程;是指对遗传信息的分子操作和施工，即把分离到的或 合成的基因经过改造，插入载体中，导入宿主细胞内， 使其扩增和表达，从而获得大量基因产物，或者令生 物表现出新的性状。;微生物在基因工程的兴起和发展过程中起着 不可替代的作用！;克隆技术是所向披靡的“六脉神剑” 还是危机四伏的“潘多拉盒”;一、基因工程的基本过程;;;;;;三、微生物学与基因工程的关系;第二节 微生物与基因工程工具酶;1. 命名与分类;根据限制酶识别和切割DNA的特点，可将限制酶分为 I、II、III三种类型;Hind III的识别序列：;HpaI的识别序列：;不同的限制性核酸内切酶识别DNA中的碱基对序列长短不同。在随机排列的DNA序列中，识别位点序列长的限制酶，在酶切后所得到的DNA片段长，相反识别位点序列短的限制酶，酶切后所得到DNA片段短。;4. 同尾酶 (Isocaudomers);二、DNA连接酶（DNA ligase）;三、其它;第三节 微生物与克隆载体;基因工程的常用载体：;一、质粒克隆载体;;;;;二、λ噬菌体克隆载体;与溶原性相关的基因可以被外源DNA取代而不影响λ噬菌体的 感染、复制和裂解宿主细胞的能力。;经过体外基因操作和包装后形成重组 噬菌体，可以通过正常的感染途径进 入宿主细胞； 重组噬菌体DNA也可不经过体外包装 而直接通过转染（转化）方式进入宿 主细胞；;质粒和噬菌体载体都可用于 构建基因文库； 但后者更有优势： 容纳的外源DNA片段较大； 以感染途径进入宿主细胞的 效率比转化高； ;;三、柯斯质粒载体;特点：;;四、M13噬菌体载体;M13克隆载体是对野生型M13进行改造后建成，其特点是虽然克隆外源DNA的能力较小，一般只适于克隆300～400bp的外源DNA片段，但特别适合用于制备克隆基因的单链DNA。;;五、噬菌粒载体;五、噬菌粒载体;六、真核生物的克隆载体;六、 人工染色体;第四节 微生物作为克隆载体的宿主;二、常用的基因工程宿主;四、外源DNA导如入宿主细胞 五、基因文库与cDNA文库的构建 六、重组体的筛选与鉴定 自学！;第五节 基因工程的常用技术和方法;;（1）变性（denaturation）：模板DNA经热变??，双链被解开， 成为两条单链。;2. PCR技术的关键酶------DNA聚合酶;本章其它有关内容 自学！;思考题