恩施黑猪PTGFR基因SNP检测及遗传多态性分析毕业答辩PPT.ppt

题目:恩施黑猪PTGFR基因SNP检测及遗传多态性分析;;前言;发情前期 黄体进一步液化，卵泡开始发育； 发情期 卵泡发育成熟； 发情后期 成熟卵泡破裂、排卵，黄体开始形成； 间情期 黄体逐渐发育，并达到最大，孕激素分泌量也随之逐渐达到最高水平，性中枢受到抑制。 若是母猪未成功受孕，其子宫内膜产生的前列腺素PGF2α通过逆流途径促进黄体退化，使之进入下一个发情周期；反之若母猪妊娠,则转化为妊娠黄体。这种暂时性的分泌器官分泌的孕酮是维持妊娠的主要激素。由于猪的胎盘不能分泌足够的孕酮来维持妊娠，在此不再赘述。 ;主要激素的变化;催产素 催产素(Oxytixin,OXT)对分娩的发动起重要的但非分娩发动的启动因子。将已妊娠绵羊或其他实验动物的垂体切除,它们仍然可以按照本身的模式分娩。将小鼠的催产素基因敲除,它仍然有正常的妊娠和分娩过程。分娩开始时血液中的OXT含量变化不大,当胎头通过产道时或者多胎动物产出一仔后,引起反射性的紧张活动,其分泌量才相对增加。妊娠早期,子宫对大剂量催产素也不发生反应,它会受到催产素酶的降解,而到妊娠后期由于降解催产素酶的逐渐消失,仅用少量催产素即可引起子宫强烈收缩。实验证明,妊娠末期子宫对催产素的敏感性可以增加20倍。临产前孕酮分泌量下降,雌激素增多,可以激发催产素的分泌。它还能刺激前列腺素的合成,进一步增强子宫的收缩。 ; 分娩的启动并非单一因素所致,而是由机械扩张、神经及激素等多种因素相互关系!彼此协调所促成。 促肾上腺皮质素释放激素（Corticotropin Releasing Hormone，CRH）可能决定分娩的起始，分娩启动前母体的CRH水平达到最高水平。切除羊胎儿的下丘脑、垂体和肾上腺可以阻止分娩,使妊娠期延长。给切除垂体和 肾上腺的胎儿滴注促肾上腺皮质激(Adrenocorticotrophic Hormone,ACTH)或者地塞米松能诱发分娩,而且给妊娠末期的胎羔滴注合成的ACTH或者地塞米松也能诱发早产。 肺泡表面活性蛋白A(Surfactant Protein A,SP-A)在妊娠完成80%时胎肺开始表达,并在出生前达到最高峰。这有可能是皮质醇促进胎肺的成熟,其分泌的SP-A进入羊水作为巨噬细胞活化和迁移的信号,确保发生炎症反应导致分娩。 有证据表明分娩前的起始与子宫内的炎症反应密切相关。胎膜未破的情况下发生的早产大约有30%在妊娠的末期有明显的炎 症。;妊娠期的QTL定位; 材料： 40头恩施黑猪来自长江大学动物科学学院实验猪场，耳组织取样。所采集的组织样均放入70%的乙醇中，-20℃保存。 设备： Sigma常温高速离心机、Sigma冷冻高速离心机、水平电泳槽、电泳仪、低温恒温水浴槽、超纯水仪、梯度PCR仪、凝胶成像系统、海尔超低温冰箱、海尔冰柜、pH计、紫外风光光度计、高压灭菌锅、制冰机、电子天平、电热恒温鼓风干燥箱、美的微波炉、超净工作台、分子杂交炉、可调式微量移液器 药品和试剂： M Tris-Cl（pH8.0)、0.5M EDTA（pH8.0）、100mM NaCl、50×TAE、5M乙酸钾、6M氯化锂、10%APS、EB染色液、10mg／ml蛋白酶K、TE缓冲液(pH8．O)、溴化乙锭（EB）、三羟甲基氨基甲烷（Tris），西班牙琼脂糖（分装）、10mM dNTP Mix、PCR引物由上海捷瑞生物合成，用超纯水配制成25pM/μl的工作液，-20℃保存、无水乙醇、三氯甲烷、异丙醇、乙醚等常规试剂由长江大学动物科学学院动物基础实验室提供。 ; 方法：; 5、PCR-RFLP分析 统计与分析： 基因型频率（Genotypic frequency）和等位基因频率（Allelic frequency） 遗传特性分析; 1、 恩施黑猪耳部组织基因组DNA提取结果： 从恩施黑猪耳部组织所提取的基因组DNA电泳条带清晰，基本没有弥散现象，且点样孔较干净。说明所提取的基因组DNA完整性好，且几乎没有多糖和蛋白质的残留，完全可以用于后续的PCR扩增和酶切反应。 ;2、PTGFR基因PCR扩增结果： 所合成的引物对40个个体均扩增出了683bp大小片段，且无杂带，可进行后续PCR-RFLP分析。 ;3、PTGFR基因PCR-RFLP酶切基因型检测结果： PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳和EB染色显影后，检测到3种基因型，条带清晰可辨，两种纯合子分别命名为AA基因型和BB基因型，杂合子为AB基因型。;4、恩施黑猪PTGFR基因群体遗传学分析;4.2?恩施黑猪PTG