苯那普利对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响.docVIP

精品论文 参考文献 苯那普利对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响 宋秀荣1 王永2 (1包头市中心医院心内科 014040;2包头市中心医院体检科 014040） 【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）9-0251-02 【摘要】目的 探讨苯那普利对缺氧/复氧(HR)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 采用纯化的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型。实验分3组：正常对照组，单纯缺氧复氧组（HR），缺氧复氧+苯那普利组(1times;10-6mol/L)。细胞缺氧1h复氧2h后取细胞培养液测定乳酸脱氢酶（LDH）的活性，取细胞测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，并用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 HR组SOD活性低于对照组, LDH、MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组,与对照组相比均有显著差异(Ｐlt;0.05)；在苯那普利用药组,ＳＯＤ活性高于HR组,ＭＤＡ含量、细胞凋亡率均显著低于HR组,Ｐlt;0.05。结论 苯那普利对HR损伤诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有抑制作用。 【关键词】缺氧 心肌细胞 自由基 细胞凋亡 苯那普利是血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI），已有研究表明它能有效清除氧自由基，在缓解氧化应激、减少脂质过氧化中均有明显的心肌保护作用[1,2]。而细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤中具有重要的病理生理学意义。本实验旨在通过对乳鼠心肌细胞造成缺氧/复氧损伤，模拟心肌缺血/再灌注损伤模型,探讨苯那普利对心肌细胞凋亡的影响及其可能的机制。 1 资料和方法 1.1实验材料 1.1.1实验动物 用生后2－3天的SD大鼠，雌雄不限，由包头医学院实验动物中心提供。 1.1.2实验仪器 CO2孵育箱(USA)；XD-101型倒置显微镜(南京江南光电集团股份有限公司)；79-1磁力加热搅拌器( 江南金坛电视大学应用电子厂)； 800型离心沉淀器(上海手术器械厂)；751分光光度计(上海第三分析仪器厂)；日历7510全自动生化分析仪。 1.1.3 试剂与药品 DMEM低糖培养基、胰蛋白酶（1：250）：北京华美公司；新生牛血清：杭州四季青生物工程研究所；SOD及MDA试剂盒：南京建成生物制品有限公司；苯那普利：北京诺华制药厂；细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC\PI Reagent Kit)购自法国IMMunotech公司。其它试剂均为国产分析纯。 1.2 实验方法 1.2.1 乳鼠心肌细胞原代培养 取出生2～3天的SD大鼠（每批约10～20只），无菌操作取出心脏,剪碎后加入0.08%的胰蛋白酶消化,分离。将细胞浓度调整至1times;106ｍl-1,分装于培养瓶中，置孵箱中培养60min,用差速贴壁法纯化心肌细胞后再培养。每2～3天换一次培养液。在培养3-4天制作缺氧复氧模型。 1.2.2 实验分组 实验分为A组：正常对照组，B组：单纯缺氧复氧组，C组：缺氧复氧+苯那普利组组(1times;10-6 molmiddot;L-1)。苯那普利在缺氧复氧期均给药。 1.2.3 缺氧复氧模型的建立 　采用Koyama等[3]方法配制缺氧(缺血)液和复氧液 (NaH2PO40.9、NaHCO36.0、CaCl21.0、MgSO41.2、乳酸钠40、HEPES20、NaCl98.5、KCl10.0 mmol?L-1，pH6.8,37℃),预先用高浓度氮气饱和(gt;99.9%1L?min-1times;30min),测其血气PO2le;4.0kPa;模拟复氧再灌注液(NaH2PO40.9、NaHCO320、CaCl21.0、MgSO41.2、葡萄糖5.5、HEPES20、NaCl129.5、KCl 5.0mmol?L-1，pH7.4,37℃) 预先用纯氧饱和。用缺氧溶液置换正常培养液即为缺氧,再用模拟再灌注液置换缺氧溶液即为再灌注。 1.2.4 观察指标及检测方法 1.2.4.1 培养液中LDH活性测定　缺氧1h再给氧2h,用酶动力学法测定。 1.2.4.2 心肌细胞SOD活性及MDA含量测定　缺氧1h再给氧2h,用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,用硫代巴比妥酸显色法测MDA含量。 1.2.4.3 ＤＮＡ染色及流式细胞仪检测细胞凋亡[4]　采用双标记染色,利用流式细胞仪进行双参数分析,测定坏死、凋亡和正常细胞的百分率,具体步骤是每份取5times;105个细胞,加入490mu;Ｌ工作浓度的结合缓