酶工程学-第二、三周生物合成理论.pptVIP

3.肽链的延伸 GDP+Pi 4. 肽链的终止 终止密码子：UAA, UAG, UGA 释放因子（Release Factor）: RF-1：UAA, UAG RF-2：UAA, UGA 5.翻译后加工 去除甲酰基 去除N-末端的氨基酸 肽链折叠 第三节 酶生物合成的调节 转录水平的调节 转录产物的加工调节 翻译水平的调节 翻译产物的加工调节 酶降解调节 组成酶：细胞内含量恒定，环境因素对这些酶的合成效率影响不大。DNA聚合酶、RNA聚合酶、糖酵解途径的酶。 调节酶：在细胞内含量变化很大，合成速率明显受环境因素影响。 诱导酶：在诱导物作用下开始或加速合成。b－半乳糖苷酶 酶的类型 酶合成的调节控制 一、原核生物中酶生物合成的调节 1960年Jacob和Monod提出的操纵子学说 （一）操纵子学说 调节基因：产生阻遏蛋白 启动基因 操纵基因：与阻遏蛋白结合 结构基因：蛋白多肽链产物 操纵子 1.RNA聚合酶结合位点 2.cAMP及其受体蛋白复合物（cAMP-CRP）结合位点 操纵子学说主要内容 操纵子学说：操纵子（operon）是指启动基因、操纵基因和一系列紧密连锁的结构基因的总称，是转录的功能单位。很多功能上相关的基因前后相连成串，由一个共同的控制区进行转录的控制，包括结构基因以及调节基因的整个DNA序列。 酶工程学 Enzyme Engineering 绪论(第一章) 酶的生产 酶的改性 酶的应用 酶生物合成的基本理论(第二章) 酶的生物合成法(第三章) 酶的提取与分离纯化(第四章) 酶改性的基本理论(第五章) 酶分子修饰(第六章) 酶固定化(第七章) 酶的非水相催化(第八章) 酶应用的基本理论(第九章) 酶反应器的应用(第十章) 酶的应用领域(第十一章) 第二章 酶生物合成的基本理论 酶的生物合成——通过细胞的生命活动而合成各种酶的过程。酶有蛋白类酶（P酶）和核酸类酶（R酶）两大类别，酶的生物合成主要是指细胞内RNA和蛋白质的合成过程。 第一节 RNA的生物合成——转录 一、中心法则 1958年 Crick： 一、中心法则 1958年 Crick： ？ 发现逆转录病毒（1970） 朊粒 1. 以“DNA”为“中心”的中心法则解读 2. 以“RNA”为“中心”的中心法则解读 （1）不具有逆转录行为的RNA病毒的中心法则之解读 （2）具有逆转录行为的RNA病毒的中心法则之解读 二、RNA的生物合成——转录 RNA的种类 dsRNA:某些病毒遗传信息载体 催化活性RNA：催化作用 tRNA：氨基酸载体 rRNA：与蛋白质共同组成核糖体 mRNA：蛋白质合成模板 sRNA：分子修饰、代谢调节作用 （一）RNA的种类和主要功能 以DNA为模板，以核苷三磷酸为底物，在依赖DNA的RNA 聚合酶作用下，生成RNA的过程。 （二）转录 RNA+4nPPi nATP nGTP nCTP nUTP DNA模板，Mg2+/Mn2+ RNA聚合酶 大肠杆菌RNA聚合酶：MW=5x105 （三）RNA聚合酶 全酶：由β β’ α ω σ组成，识别转录起始位点，与DNA上的启动基因结合，使转录开始。 核心酶：由β β’ α ω组成，进行核苷酸链的延伸。 1960年， Harowitz和Weiss 真核生物RNA聚合酶：三种 聚合酶种类 RNA聚合酶I RNA聚合酶II RNA聚合酶III 别名 rRNA RNA聚合酶 不均一RNA聚合酶 小分子RNA聚合酶 存在位置 核仁 核仁 核质 相对分子质量/103 550 600 600 催化反应产物 rRNA mRNA tRNA 5SrRNA RNA生物合成的起始位点在DNA的启动基因（启动子)上 （四）转录的起始 起始阶段的重要问题是RNA聚合酶与DNA的启动基因的相互作用，起始阶段包括： 全酶的形成 酶与模板结合 酶与启动基因结合 模板DNA局部变性 转录开始 酶的移动方向 （五）转录的延伸 重旋 解旋 转录泡，17bp （六）转录的终止 大肠杆菌中的两类终止子： 不依赖于ρ因子的终止子 依赖于ρ(rho)因子的终止子 模板DNA分子上每个基因或每个操纵子都含有一个终止信号——终止子。当RNA聚合酶转录到达这个信号时，合成的RNA分子以及聚合酶与模板DNA分离，RNA链的合成便被终止。 1. 不依赖于ρ因子的终止子 2. 依赖于ρ因子的终止子 1.剪切反应 2.剪接反应 3.末端连接反应： （七）RNA前体的加工 tRNA3’-末端加上CCA-OH尾巴 在mRNA的5’-末端加上“帽子”结构5’-m7GpppNmpNp 在mRNA 的3’-末端连接polyA尾巴 tRNA5’-末端加上甲基鸟苷酸 4. 核苷修饰反应 tRNA3’-末端加上CCA-OH尾巴 CCA-OH尾巴的