植物的脱毒技术PPT.ppt

四、植物脱除病毒的方法 热空气处理：热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好，将生长的盆栽植株移入温热治疗室（箱）内，一般在35～40℃。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。 四、植物脱除病毒的方法 香石竹于38℃下处理2个月，其茎尖所含病毒即可被清除。马铃薯在35℃下处理几个月才能获得无病毒苗。草莓茎尖培养结合36℃处理6周，比仅用茎尖培养可更有效地清除轻型黄斑病毒。 四、植物脱除病毒的方法 （2）热处理脱毒法优缺点 优点： 要求的设备条件比较简单，脱毒操作也比较容易。 缺点： 1、脱毒时间长，脱毒不完全； 2、对球状病毒和类似纹状的病毒以及类菌质体所导致的病害才有效，对杆状和线状病毒的作用不大。 3、热处理后只有一小部分植株能够存活。 四、植物脱除病毒的方法 2、茎尖培养脱毒 （1）原理 病毒在植物体内的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点（约0.1～1.0mm区域）则几乎不含或含病毒很少。这是因为分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。 四、植物脱除病毒的方法 （2）方法 ①材料的消毒 茎尖既可来自于大田或是盆栽，也可以来自无菌苗。 来自大田或是盆栽的要进行外植体的消毒，消毒方法则是根据经验灵活运用，与器官培养基本一致。 另外，培养外植体的环境为清洁干净为好，并且给植株定期喷施内吸型杀菌剂（如多菌灵等）或抗生素（如0.1%链霉素）。 四、植物脱除病毒的方法 ②剥取茎尖： 由于微小的茎尖组织很难靠肉眼操作，因而需要一台带有冷光源的解剖镜(8～40X)。剥离茎尖时，可在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，有助于防止茎尖变干。茎尖剥离后，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好。 四、植物脱除病毒的方法 操作时，一手用细镊子将其按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下来，为了提高成活率，可带1～2枚幼叶，然后将其接到培养基上。 热处理结合茎尖脱毒培养 龙牙百合茎尖 茎尖的分化 龙牙百合小苗 四、植物脱除病毒的方法 ③接种培养： 接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接种即可。 培养温度：22℃左右的温度； 光照条件：每天16h，光照强度2000～3000Lx；  茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器官的培养相同，这里不再叙述。 四、植物脱除病毒的方法 (3)影响微茎尖培养的因素 ①外植体大小 在最适培养条件下，外植体的大小决定茎尖的存活率，外植体越大，产生再生植株的机会也就越多，而外植体越小脱毒效果越好。除了外植体的大小之外，叶原基的存在与否也影响分生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。 四、植物脱除病毒的方法 ②培养条件 由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间有利于茎尖的培养。微茎尖需数月培养才能成功。 ③外植体的生理状态 茎尖最好要由活跃生长的芽上切取，在香石竹和菊花中，培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。但在草莓中，二者没什么差别。 四、植物脱除病毒的方法 (4)茎尖培养的优缺点： 优点： 茎尖培养脱毒法脱毒率高，脱毒速度快，能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料。 缺点： 技术要求高，植物的存活率低。 四、植物脱除病毒的方法 茎尖脱毒培养的两个关键技术环节是茎尖的成活率和脱毒率。褐化是降低茎尖培养成活率的首要因素，褐化的发生与许多因素有关，茎尖大小及受伤程度、取材季节、培养方式、激素浓度、基本培养基、培养基添加物都对茎尖褐化有影响，茎尖越小，受伤越多，褐化就越严重，成活率越低。 四、植物脱除病毒的方法 在茎尖培养时为抑制褐化的发生，需要优化上述各因子。应用抗氧化剂ＡＣ和Ｖｃ也可有效抑制茎尖培养的褐化现象。此外，在茎尖培养基中，应尽量多加些有机营养成分，如水解酪蛋白、水解乳蛋白和椰乳等，有利于茎尖分生组织的培养。 小结 剥取的茎尖大小与茎尖的成活率呈正相关系，茎尖越大，成活率越高。茎尖越小，受伤越越多，褐化就越严重，成活率越低。 茎尖大小与脱毒率呈负相关，茎尖越大，脱毒率就越低，茎尖越小，脱毒率就越高。 四、植物脱除病毒的方法 马铃薯脱毒快繁图片 龙牙百合脱毒种苗生产图片 四、植物脱除病毒的方法 3、抗病毒药剂法 （1）原理 抗病毒剂主要作用是抑制病毒增殖或移动，但抗病毒剂抑制病毒增殖的机理尚不完全清楚,可能是抑制病毒ＲＮＡ磷酸盐的合成或者使某些病毒暂时处于无活性状态。 四、植物脱除病毒的方法 许多化学药品（包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等）对离体组织和原生质体具有脱毒效果。常用的药品有：三氮唑核苷（病毒唑