膜片钳法研究镧对心肌细胞钾通道的作用.pdfVIP

维普资讯 论 文 第50卷第6期 2005年3月 讲 学 扛 膜片钳法研究镧对心肌细胞钾通道的作用 杨 频 薛绍武 杜会枝 (山西大学分子科学研究所，化学生物学与分子工程教育部重点实验室 太原 030006．联系人，E—mail：yangpin@sxu．edu．cn) 摘要 用全细胞膜片钳技术研究了La对大鼠心室肌细胞钾通道的作用机理．灌流法酶解得到单个大 鼠心室肌细胞，给细胞施一跃迁电压可引出一非钙依赖性电压激活的外向钾电流．将不同浓度的 La“ 加入细胞外液后，非钙依赖性电压激活的外向钾电流明显减小，且随着浓度增加抑制作用增强．心肌细 胞钾通道电流作为心肌动作电位的主要复极化电流，受到 Lan的抑制作用，这提示在研究稀土生物效 应时应该重视它对心脏功能的影响． 关键词 心室肌细胞 钾通道 全细胞膜片钳 La“ 稀土元素在我国农业中得到了广泛应用，除了 用全细胞膜片钳技术研究了镧离子对大鼠心肌细胞 农作物外，在畜牧业中作为饲料添加剂及治疗某些 钾通道的作用，目的在于从通道水平揭示La对心肌 疾病的药物等的应用已取得了成效性的结果，但无 功能的影响． 论在农业还是药物中的应用，均需研究稀土元素进 1 材料与方法 入动植物体内的作用机理以及对生物效应的影响， (i)单个心肌细胞的分离．按文献方法6『略加 从而能科学地作出其长期使用后的危险性评价l】】．近 修改：Wistar大鼠，250一v300g，雄雌不拘，由中国科学 年来的研究已深入到分子水平和细胞水平．稀土进 院辐射防护研究院动物房提供．猛击大鼠头部，击昏， 入体内后细胞膜是其重要的靶物质之一，详细研究 迅速开腔取出心脏，置于 100％ O2饱和的冰浴的 稀土对细胞膜的作用是阐明其生物效应的基础．有 Free—Ca Tyrode溶液 中，主动脉插管，37℃于 关稀土跨细胞膜的研究工作进行了很多，结果也存 Langerdorff离体心脏灌流装置上逆行灌流．先用 在很大的争议，从侧面也说明了此项研究工作的复 Free—Ca“Tyrode溶液灌流5min，再用含collagenase 杂性．杨频研究小组 ·用全细胞膜片钳技术研究了 10．03％，Taurine0．25％，Ca 50lamol／L的低钙酶溶 稀土镧离子对心肌细胞 L型钙通道、钠一钙交换体 液灌流至心脏变白发软，体积膨大．最后分段剪块， 的作用，结果发现La对L型钙通道电流具有抑制作 置于 100％O2饱和的KB溶液中，用吸管轻轻吹打使 用，说明La不能以钙通道过膜；在记录到 Na．Ca 细胞分散，l90 目(m)尼龙网过滤掉碎片，分离得到 交换电流后以相同浓度的 La代替 Ca ，则记录到 的单个心肌细胞室温放置 4h后用来进行膜片钳 Na．Lan交换电流，结果说明La能以Na一La交换 实验． 的形式通过心肌细胞膜． (ii)膜片钳记录．膜片钳全细胞记录模式根据 镧系元素在人体内的含量与疾病有关，心肌梗 Hami