菌紫质光循环中间体M的双相衰减：蜂毒素及其定点突变体的影响.pdfVIP

维普资讯 讲 学血 柱 第40卷 第 10期 CHINESE SCIENCEBULLETIN 1995年 5月 菌紫质光循环中间体M 的双相衰减：蜂毒素 伽 及其 向够 中 物 Ⅻ 关-词 堕堕—mm—t． 天点 群 ，、 菌紫质 (bacteriorhodopsin，BR)是嗜 菌(日． 的蛋 白成分，能将光能转换成 电化学能 1．明适应的BR受光激发，约 500fs(10。。s)后生成过 渡态 J，约 3ps(10 s)之后转变成含 13一顺生色 团的中间态K，然后历经 L，M，N，O等中 间态在 l0～ 20ins内回到 BR．随着循环的进行，质子从细胞质侧转运到细胞外侧，产生跨膜 质子梯度 ．BR的光循环中间体 M 的生成和衰减与质子转运密切相关 ．快速动力学分析表 明M 的衰减过程至少可 以分出快 (M 、慢 (M ．)两种成分 ．关于两种 M 衰减成分产生于 BR光循环的哪个步骤 ，已经提 出了多种看法口～ ．但 目前仍没有一个广为认 同的解释 ． 蜂毒索 (melittin)是欧洲蜜蜂 (itmellifera)毒液主要的蛋 白成分，由26个氨基酸组成． 在生理条件下，蜂毒素分子具有双亲性，因此能从溶液中插入膜 中，引起膜 的通透性 的变化 ， 并与膜蛋 白作用，影 响其存在状态和功能 ．利用蜂毒索及其突变体对M 半衰期的不同影响， 我们证实了蜂毒索与BR之间存在静 电相互作用月．本文进一步检测光循环 M 产量 的变化 以加强这一论点．同时，蜂毒索及其突变体对紫膜及酰化紫膜 M 中间体产量 的不 同影响提示 酰化可能改变 了BR的光循环历程．另一方面，由于蜂毒索对紫膜的影 响比其它物理或化学 方法的影响弱 ，根据 M 的两种衰减成分的产量及速率的变化，可对 BR 的光循环模型作出判 别．据此我们提出M 的衰减可能通过一分支途径． 1 材料与方法 1．1 紫膜 (PM)和酰化紫膜 (APM)的制备 紫膜制备按经典方法．简言之，嗜盐菌低氧培养后，经离心、破膜和进一步提 纯即得到高 纯度的紫膜，再溶于双蒸水，4C 以下保存 ．实验前稀释至所需浓度 ． 紫膜酰化按照通用方法．酰化紫膜每个 BR 分子表面平均有 5．5个赖氨酸被酰化 (ESR 测量结果)．APM 亦配成浓溶液、4C以下保存，实验前再稀释 ． 1．2 蜂毒素及其定点突变体的准备 蜂毒素 (购 自Sigma公司，并经 HPLC纯化)及其定点突变体 (Cherry赠送 ，Univ．Essex， 1994-08-29收稿．1994,-12．-~收管改稿 + 中国科学腕重大项 目基金资助项 目 料 联系人 维普资讯 第 10斯 科 学 通 报 UK)配成双蒸水贮存液 (0．15mmol／L)冷冻保存 ．实验时直接滴加到样品中，并振荡摇匀．蜂 毒素及其突变体的氨基酸顺序及生理条件下的带电状态见图 1 1．3 测■系统 蜂毒素 rGⅪAvL ．vLTrGLPALwI-+毒 毒0 QQ-c0N0 0 M ：的闪光动力学光谱的 测定和分析遵从 经典方法． 突变体 1 ，-+JGLGAvL -VL耵GLPALwI_矗-十毒一QQ-c0N 测量光束经单 色仪后穿过可 突变体2 idGAⅥ-+_vJ咖 ALJswI-+-十一QQ。0N 调 恒温