薄膜过滤反注培养基法检查抑菌药品微生物限度分析.docVIP

精品论文 参考文献 薄膜过滤反注培养基法检查抑菌药品微生物限度分析 张哲 褚良 　　(盘锦市食品药品检验所 124010) 　　【摘要】目的：研究薄膜过滤反注培养基法在抑菌药品微生物限度检查过程，分析其方法实施的可行性。方法：采用活菌培养计数，倾注法回收率按100%计，比较反注法与贴膜法的差异。结果：金黄色葡萄球菌: 反注法回收率为95.23%, 贴膜法回收率为95.01%，两种方法差异无统计学意义（P gt; 0.05）；大肠杆菌回收率分别为95.66%和95.01%，两种方法差异无统计学意义（P gt; 0.05）；白色念珠菌回收率分别为91. 95% 和93.50%，两种方法差异无统计学意义（P gt; 0.05）。结论: 对标准菌株培养计数回收率进行检验，发现反注法与贴膜法比较差异无统计学意义，但反注法能简化实验操作, 减少操作污染，值得在实践检查过程中应用。 　　【关键词】薄膜过滤反注培养基法 贴膜法 抑菌药品 微生物限度检查 　　【中图分类号】R446.5 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085（2014）03-0262-02 　　微生物学检查方法包括微生物限度检查法和无菌检查法。微生物限度检查法是检查非规定灭菌制剂及原辅料受微生物污染程度，包括细菌、霉菌等菌种的数目及控制菌检查。无菌检查法是检查药典要求的无菌药品、原辅料等是否无菌。薄膜过滤法,较多应用于含抑菌成分供试品微生物限度检查, 但实际工作中很容易被污染，本研究设计了一种薄膜过滤计数培养器,完成过滤冲洗后,不取出滤膜,直接在滤膜背面注入培养基培养计数，被称为薄膜过滤反注培养基法。为了检验该方法应用效果,并与贴膜法进行了比较。现报告如下。 　　1 材料 　　1.1 试验材料 薄膜过滤计数培养器（自制），薄膜过滤器100mL，两者滤膜直径和孔径分别均为50mm和0.45mu;m (杭州高得医疗器械有限公司)；白色念珠菌(CMCC (F)98001)、金黄色葡萄球菌( CMCC(B) 26003) 、大肠杆菌(CMCC (B) 44103 )。 　　1.2 薄膜过滤计数培养器结构 培养器外体为透明材料组成，培养器经环氧乙烷灭菌包装。 　　1.3 薄膜过滤计数培养器工作原理，参考相关文献[1] 　　1.4统计学方法 数据使用SPSS 17.0进行统计，组间资料用t检验，计数资料用chi;2检验，计量单位用（xplusmn;s）表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。 　　2 方法与结果 　　2. 1 对照菌液的制备 金黄色葡萄球菌菌液以及大肠杆菌菌液：取金黄色葡萄球菌（大肠杆菌）的营养琼脂培养基培养物，接种于营养肉汤培养基中,温度在30～35，培养19h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至含菌50～100个/ml；白色念珠菌菌液: 取白色念珠菌的真菌琼脂培养基培养物，接种于真菌培养基中, 温度在20～25，培养24h, 用0. 9% 无菌氯化钠溶液稀释至含菌50～ 100个/ml。 　　2. 2 薄膜过滤反注培养基法培养计数效果试验薄膜过滤反注培养基法:取对照菌液1.0mL,加入100mL0.9%无菌Nacl溶液中,减压抽滤,使用0.9%无菌Nacl溶液冲洗4次,每次150mL，然后反注培养基。贴膜法:取对照菌液1.0mL,加入100mL0.9%无菌Nacl溶液中,减压抽滤,使用0.9%无菌Nacl溶液冲洗4次,每次150mL。菌面向上,直接贴在平皿内（已浇注培养基）。倾注法:在平皿内先加入对照菌液1.0mL,再倾注培养基。金黄色葡萄球菌、大肠杆菌用营养琼脂培养基，在温度30～35条件下培养48h计数,白色念珠菌用真菌琼脂培养基在温度20～25条件下培养72h计数。每次试验重复5次，并做平行试验3个。金黄色葡萄球菌:反注法回收率为95.23%,贴膜法回收率为95.01%，两种方法差异无统计学意义（Pgt;0.05）；大肠杆菌回收率分别为95.66%和95.01%，两种方法差异无统计学意义（Pgt;0.05）；白色念珠菌回收率分别为91.95%和93.50%，两种方法差异无统计学意义（Pgt;0.05）。见表1。 　　表1 不同菌株两种方法回收率比较 　　 　　2.3 实际样品检查 按照中国药典微生物限度检查法[2] ,使用薄膜过滤反注培养基法、贴膜法，分别对3种制剂进行检查, 每批样品取原液及稀释10倍的原液, 各取培养器4只, 注入供试液, 加入0.9%无菌Nacl溶液50ml，过滤, 以0.9%无菌Nacl溶液冲洗4次, 每次150mL。2套培养器进行细菌培养,其余2套培养器进行真菌培养。贴膜法同上述处理。见表2。 　　表2 两种方