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Company Logo LOGO 基因工程抗体的种类 Company Logo 历史与发展 第一代：多克隆抗体（PcAb） 第二代：单克隆抗体（ McAb ） 第三代：基因工程抗体（ GEAb ） Company Logo 基因工程抗体的种类 五、人源化抗体 二、小分子抗体 三、抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 一、胞内 抗体 六、噬菌体抗体库技术 Company Logo （一）胞内抗体 在细胞内表达，并能特异性的靶向胞内抗原以实现对相应功能的调节甚至阻断。胞内抗体能定位于胞浆，胞核，内质网，线粒体，高尔基体，细胞膜等。 （二）抗体融合蛋白 将抗体分子片段与其他蛋白融合，可得到多样性生物功能的融合蛋白。 Company Logo （三）小分子抗体 抗原结合片断（ Fab ） 可变区片段（ Fv ） 单链可变区片段（ ScFv ） 单区抗体（ SdAb ） Company Logo Company Logo 双特异性抗体的构建策略 化学交联BsAb 细胞工程BsAb 基因工程BsAb Company Logo 1.嵌合抗体 从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。 （五）人源化抗体 2.改形抗体 指利用基因工程技术，将人抗体可变区中互补决定簇（CDR）序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。 Company Logo （五）人源化抗体 Company Logo （六）噬菌体抗体库技术 定义： 噬菌体抗体库技术(phage display antibody library techniques) 是指用聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR) 扩增抗体的全套可变区基因,通过噬菌体表面展示技术,把Fab 段或单链抗体(ScFv) 表达在噬菌体的表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体。 Company Logo Company Logo 将外源基因导入噬菌体载体 Company Logo 经典的筛选方法有两种 一是将纯抗原包被在固相介质上,如酶标板、免疫试管或亲和层析柱,然后加入待筛选的噬菌体,洗去非亲和性的噬菌体,回收高亲和性的噬菌体。（固相筛选） 二是将抗原与生物素基团相连,再将其固定在包被有链霉蛋白抗生素的顺磁珠上对噬菌体进行筛选。（液相筛选） Company Logo 小结 1.基因工程抗体的种类？ 2.噬菌体抗体库技术？ 3.什么是基因工程抗体？ 六种 基因水平 Company Logo LOGO * 抗体由两条轻链（light chain,L）和两条重链（heavy chain, H）组成，相同的两条重链轻链间二硫键（disulfide）连接呈“Y”型 ，抗体的结构分为三区：V区 C区 和绞链区。其中轻链和重链的可变区相互作用形成Fv，为抗原结合部位 。氨基酸序列的变异集中的几个较小区域被成为高变区或超变区。由于超变区在结构上与抗原互补，因此也称互补决定区CDR。在立体构象中，它们位于Fv的末端，直接参与抗体与抗原的结合。 * 胞内抗体技术主要应用在抑制病毒复制特别是HIV21 复制、肿瘤基因治疗方面,已经逐渐拓展到中枢神经系统疾病、移植排斥和自身免疫性疾病等领域 将抗体分子片段与其他蛋白融合，可得到多样性生物功能的融合蛋白，如： 　　1.含Fv段的抗体融合蛋白：将Fv与某些毒素、酶、细胞因子基因拼连，通过这些抗体的引导，可将其生物活性物质导向靶细胞特定部位，所谓“生物导弹”。 * 将两种不同抗体的可变片段通过基因工程的手段连接起来，可构建同时具有两种抗体特性的双特异性抗体，作为免疫导向药物用于肿瘤的治疗和病毒的感染，或者提高抗体的亲和能力。 * 化学交联：使用化学交联剂将两个完整的免疫球蛋白分子或其抗原结合臂F（ab’）2片段连接起来.分别分离纯化两种不同的McAb，使各抗体解离为单价抗体，再使两种不同抗原特异性的单价抗体通过化学试剂交联起来，然后分离出目的组分。此法缺点是容易导致抗体失去活性，产物均一性不佳 细胞工程抗体是将两种分泌不同特异性单抗的杂交瘤细胞进行再次融合，产生四源杂交瘤 (quadroma)。但二次杂交瘤细胞株分泌的是两套重链，轻链的随机组合物。BsAb在其中的比例可为10%～50%不等。多倍杂交瘤细胞的稳定性差，BsAb的产量少且活性低，费时费力，临床应用时存在人抗鼠抗体免疫反应 (HAMA)，