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人骨髓源间充质干细胞分离培养技术
人骨髓源间充质干细胞分离培养技术 注意： 多份样本应提前标注； 放入CO2孵箱前应松瓶口，并注意孵箱内水盒是否有水； 放入液氮箱前应先置于冰箱降至-80℃。 * * 取骨髓 分离单个核细胞 去除悬浮液 24~48h 换 液 消化传代 冻 存 80% 72h 分 离 单 个 核 细 胞 12~18ml (75 cm2) 6ml (25 cm2) 培养瓶 淋巴细胞分层液 离心管 骨髓样本(缓慢) (经ＰＢＳ稀释３～４倍) 离心机 1400rpm×30min (慢) 离心机 1200rpm×10min 废液缸 PBS 或 N.S. 或 D-HANKS 离心机 1200rpm×10min 废液缸 工作液 单个核细胞 PBS 去 除 悬 浮 液 废液缸 PBS 或 N.S.冲洗 工作液 废液缸(半量) 工作液 换 液 显微镜观察3~5 min PBS 或 N.S.冲洗 5ml PBS 5%trypsin+EDTA 0.125~0.25ml 废液缸 25 cm2 血清200 ul 离心机 1200rpm×10min 混合液 废液缸 PBS 或 N.S. 离心机 1200rpm×10min 废液缸 工作液 75 cm2 消 化 传 代 显微镜观察3~5 min PBS 或 N.S.冲洗 5ml PBS 5%trypsin+EDTA 0.125~0.25ml 废液缸 血清200 ul 离心机 1200rpm×10min 混合液 废液缸 PBS 或 N.S. 离心机 1200rpm×10min 废液缸 1ml 冻存液 PBS 或 N.S. 离心机 1200rpm×10min 废液缸 冻存管 冻 存
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