超高效液相色谱法测定水产品中的酚类物质.docVIP

精品论文 参考文献 超高效液相色谱法测定水产品中的酚类物质 刘 丽 罗展纲 蔡志斌（深圳市龙岗区疾病预防控制中心 广东深圳 518172） 【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)25-0153-03 【摘要】 采用超高效液相色谱法（UPLC）测定水产品中的酚类物质，以吉尔森 GX-271 ASPEC 固相萃取系统萃取小柱预分离和富集，甲醇-l％乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱。柱温30℃，进样量5mu;L，流速0.6 ml/min，190-400 nm波长紫外检测。经测定，水产品中含有儿茶酚、2,4,6-三氯苯酚、4-硝基苯酚、2-氯苯酚、苯酚和五氯苯酚等酚类物质，其中苯酚占检测到的酚类物质总量的60％以上。该方法用于水产品中的酚类物质测定，结果令人满意。 【关键词】 超高效液相色谱 水产品 酚类物质 食品安全是当今世界人们所关注的焦点问题之一，每年食源性疾病（因食用不安全的食品）而导致数亿人患病，并造成人员死亡。酚类化合物是水体中常见的有机污染物，其在水中的含量超过一定浓度时，不仅会发出异臭，而且还会危害水生生物的生长和发育，并使其富集在动植物体内，被人食用后有害无益。因此为保障消费者食品质量安全，满足水产品检测需要，有必要研究开发出水产品中酚类物质快速、准确的色谱检测方法[1]。 近年来，在食品安全检测技术方面，由于各种先进技术的不断出现和日趋成熟，先进仪器技术的使用也越来越广泛。常用的检测酚类物质的方法主要有紫外-可见分光光度法、差示分光光度法、吸附溶出伏安法、薄层色谱法和高效液相色谱法（HPLC）等[2～6]，前三种方法只能测定总酚量，不能单独测定某种酚类物质的含量；薄层色谱法定量分析的精度较差；高效液相色谱法稳定性高，重现性好，是目前分析酚类物质的常用的有效方法；超高效液相色谱（UPLC）的原理与HPLC相同，但其提高了分析的速度、灵敏度及分离度，扩大了色谱柱的pH值范围[7～11]。本实验通过超高效液相色谱法对水产品中酚类物质进行检测，建立了适用于各种水产品中酚类物质测定的方法，以期为今后水产品中酚类物质的检测提供方法依据。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 带鱼、乌贼、鳗鲡、对虾、海蟹、海带和海蜇等6种水产品均购自水产品市场。儿茶酚、2,4,6-三氯苯酚、4-硝基苯酚、2-氯苯酚、苯酚和五氯苯酚标准品，甲醇-l％乙酸、乙酸胺、磷酸等，其余试剂均为国产或进口分析纯。 1.2 仪器 ACQUIITY型超高效液相色谱仪（带紫外检测器）、GX-271 ASPEC 固相萃取系统、TGL-16G型高速离心机、JS-TurboVap氮吹仪、AE200电子天平、涡旋仪、恒温水浴锅、TDL-408型低速离心机、酸度计等。 1.3 色谱条件 色谱柱：Acquity BEH C18柱(4.6mmtimes;150mm，5mu;m)，紫外检测波长190-400nm，柱温30℃，进样量5mu;L，流速0.6ml/min，流动相A为甲醇，流动相B为蒸馏水，用磷酸调pH为3.7。梯度洗脱均呈线性变化。 1.4 溶液的配制 准确称取一定量的儿茶酚等6种酚类标准品，用甲醇溶解并转移至10ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，作为标准贮备液。使用前根据实验需要配制标准工作液和混合标准工作液。 切取新鲜样品组织于碎肉器中迅速绞碎至肉糜状，混匀。准确称取2.00 g待测样品于塑料离心管中，加入10ml乙酸胺缓冲溶液，于涡旋仪中振荡5min，4000r/min，离心5min。准确吸取1.0ml上层清液以2ml正己烷萃取。重复萃取2次，合并萃取液于吹氮管中。萃取液以50℃水浴吹氮至干。准确加入1.0ml甲醇溶解残渣，过0.45mu;m 滤膜，待测。 2 结果与讨论 2.1 检测波长的选择 分别用甲醇配置一定浓度的标准品溶液，在190-400nm波长范围内扫描各标准品的紫外吸收情况。结果显示，各标准品在260nm均具有较强的吸收峰（见图1所示），紫外光谱图可得各酚的最大吸收波长：儿茶酚265.1nm、2,4,6-三氯苯酚373.2nm、4-硝基苯酚310.2nm、2-氯苯酚291.3nm、苯酚265.2nm和五氯苯酚283.9nm，各酚都在最大波长处提取色谱图计算峰面积定量。实验过程中还发现，样品在260-300nm处亦有较强的吸收峰（见图2所示），因此选用该波段进行检测。 。 1. 儿茶酚、2. 2,4,6-三氯苯酚、3. 4-硝基苯酚、4. 2