肺炎嗜衣原体MOMP基因的克隆与原核表达-重庆理工大学学报.PDFVIP

第２８卷　第４期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１４年４月 Ｖｏｌ．２８　　Ｎｏ．４ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ａｐｒ．２０１４  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１４．０４．０１５ 肺炎嗜衣原体 ＭＯＭＰ基因的克隆与原核表达 １，２ ２，３ ２，３ ２ １ ２ 张存亮 ，聂福平 ，王　昱 ，杨　俊 ，李应国 ，蔡家利 （１．重庆理工大学，重庆　４０００６０；２．重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心， 重庆　４０００２０；３．重庆大学，重庆　４０００３０） 摘　　　要：克隆了肺炎嗜衣原体外膜主蛋白（ｍａｊｏｒｏｕｔｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＯＭＰ）基因，并进行 了原核表达。根据 ＧｅｎＢａｎｋ公布的肺炎嗜衣原体 ＭＯＭＰ基因序列，设计克隆引物后用普通 ＰＣＲ方法扩增出肺炎嗜衣原体ＭＯＭＰ基因的完整片段，将其克隆到ｐＭＤ１９Ｔ后进行测序，经序 列比对正确后将此片段亚克隆到表达载体ｐＥＴ３２ａ（＋）中，转化至大肠杆菌Ｒｏｓｅｔｔａ（ＤＥ３），经 ＩＰＴＧ诱导表达，再采用ＳＤＳＰＡＧＥ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测重组蛋白的表达情况。结果表明：本研 究克隆了肺炎嗜衣原体ＭＯＭＰ基因并在原核系统中成功表达了ＭＯＭＰ重组蛋白，且 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ显示该重组蛋白具有免疫学活性。 关　键　词：肺炎嗜衣原体；ＭＯＭＰ基因；克隆；原核表达 中图分类号：Ｑ３１　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１４）０４－００６８－０４ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＭＯＭＰ ＧｅｎｅｏｆＣｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａＰｎｅｕｍｏｎｉａｅ １，２ ２，３ ２，３ ＺＨＡＮＧＣｕｎｌｉａｎｇ ，ＮＩＥＦｕｐｉｎｇ ，ＷＡＮＧＹｕ ， ２ １ ２ ＹＡＮＧＪｕｎ，ＬＩＹｉｎｇｇｕｏ，ＣＡＩＪｉａｌｉ （１．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００６０，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＣＩＱ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００２０，Ｃｈｉｎａ； ３．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００３０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅＭＯＭＰｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｅｏｆｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｐｒｏ ｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＴｈｅＭＯＭＰｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｅｏｆＣｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ ｎｏｒｍａｌＰＣＲｗｉｔｈｄｅｓｉｇｎｅｄｃｌｏｎｉｎｇｐｒｉｍｅｒｓｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｒｅｐｏｒｔｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋ．ＴｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄＭＯＭＰ ｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｅｗａｓｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｃｌｏｎｉｎｇｖｅｃｔｏｒｐＭＤ１９Ｔａｎｄｔｈｅｎｗａｓｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔ ＭＯＭＰｇｅｎｅｗａｓｓｕｂｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｅｘｐｒｅｓｓｅｄｖｅｃｔｏｒｐＥＴ３２ａ（＋）ｆｏｒｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＲｏｓｅｔｔａ （ＤＥ３）ｉｎｄｕ