实验室技术资料1.docVIP

实验室常用技术参数资料 常用核酸蛋白换算数据 　　（1）重量换算 　　1μg=10-6g　　　　　 1pg=10-12g 　　1ng=10-9g 　　　　　1fg=10-15g 　　（2）分光光度换算： 　　1A260双链DNA=50μg/ml 　　1A260单链DNA=30μg/ml 　　1A260单链RNA=40μg/ml 　　（3）DNA摩尔换算： 　　1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端 　　1μg pBR322 DNA=0.36pmol 　　1pmol 1000bp DNA=0.66μg 　　1pmol pBR322=2.8μg 　　1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿 　　1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿 　　1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿 　　（4）蛋白摩尔换算： 　　100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 　　100pmol分子量50，000蛋白质=5μg 　　100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 　　氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿 　　（5）蛋白质/DNA换算： 　　1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质 　　10，000MW蛋白质=270bp DNA　　 30，000MW蛋白质=810bp DNA 　　50，000MW蛋白质=1.35kb　 　100，000MW蛋白质=2.7kb DNA 　　二、常用缓冲液 　　1．分子克隆常用缓冲液 　　2．磷酸缓冲液 　　（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※ pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml) 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 27.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.2 　　（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※ pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml) 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 17.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7 7.0 57.7 42.3 7.2 68.4 31.6 7.4 77.4 22.6 7.6 84.5 15.5 7.8 89.6 10.4 8.0 93.2 6.8 　　※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值： 　　pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体]) 　　在此，pK’=6.86(25℃)。 　　3．电泳缓冲液 　　测序凝胶加样缓冲液 　　98%去离子甲酰胺 　　10mol/L EDTA(pH8.0) 　　0.025%二甲苯青FF 　　0.025%溴酚蓝 　　甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。 常用的电泳缓冲液 缓冲液 使用液 浓贮存液（每升） Tris-乙酸（TAE） 1×：0.04mol/L Tris-乙酸 50×：242g Tris碱 　 0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸 　 　 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE） 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris碱 　 0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml） 　 　 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 5×：54g Tris碱 　 0.001mol/L EDTA 27.5硼酸 　 　 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液b 1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH 　 1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸c 1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris 　 250mmol/L 甘