影响南方红豆杉细胞生长及紫杉醇含量的因素.pdfVIP

第 %卷 第 ’期 生 态 科 学 L,-;%0,;’ %%!年 !月 CG,-,?HGIGHJKGJ DJG;%%! 影 响 南 方 红 豆 杉 细 胞 生 长 及 ! 紫 杉 醇 含 量 的 因 素 !!! 苏 应 娟 ， 王 艇 ， 李 雪 雁 ， 杨 礼 香 ， !!! 范 国 宽 ， 柯 亚 永 ， 朱 建 明 （!#中山大学生命科学学 院，广东 广州 $!%$； 华 中师范大学生命科学学 院，湖北 武汉 ） # ’(%% 摘 要：研究了影响南方红豆杉细胞生 长及紫杉醇含量的稀土和氮源 。结果表 明，较低 浓度 （ *$）的稀土元素对南 方红豆杉细胞的生长 及紫杉醇的合成有一定促进作用，较高 !)!%+,-./ *’ *$ 浓度 （!)!%+,-./）的稀土元素则起抑制作用。(种稀土中以使用 !%+,-./的镱效果最好 。 当 2*质量浓度 比例为 以及总氮源浓度为 时，细胞的生 长率和紫杉 醇的 01.03.$++,-./’( 含量达到最大。 关键词：南方红豆杉；紫杉醇；稀土；氮源 中图分类号： 文献标识码： 文章编号 ： （ ） 45!(6!%%5755(%%!%’7%%!7%’ 紫杉醇 （ ）是从红豆杉属植物 中提取的一种萜类化合物 ，对 白血病、转移性乳腺 89:,- 癌 、卵巢癌、恶性黑色素瘤 均有疗效，被美 国国立癌症研 究 所誉为过去 !$年 内开发 的 ［］ ! “最好的抗癌制剂” 。目前紫杉醇的价格非常昂贵 ，主要从红豆杉类植物 的树皮 中制备 ， 但其原植物中的含量仅为干质量 的 %;%%$=%;%。由于红豆杉类植物 多属珍稀物种 ， 生长又十分缓慢，而全球每年需要紫杉醇 %%=(%%?，因而造成紫杉醇生产 的原料供应 极度匮乏，需要进一步寻找新的植物资源和新技术生产紫杉醇［］，植物组织细胞培养生产 紫杉醇 已成为 目前 的研 究热点。细胞 的生长和次生代谢 的积累与培养基的组成和诱导 因素 有着密切的关系 ，特别是氮源的浓度 、硝态氮和铵态氮 的比便以及诱导子对提高红豆杉细 ［(］ 胞 的合成与紫杉醇的释放尤为有利 。本文研究了氮源 以及稀土元素 /9，@A和 BA为诱导 子对南方红豆杉细胞培养及紫杉醇含量的影响 。 !材 料 与 方 法 !;!实验材料 南方红豆杉无性系 由南方红豆杉芽诱导、多次继代 、液体培养而来。将稀土氧化物转 化稀土氯化物 ， 标定浓度后用缓冲液配制成稀土氯化物溶液 。稀土 购 自广州 CD@6 /93 ( 珠江冶炼厂， 和 取 自上海越龙化工厂。在盐酸和盐酸羟胺中溶解后，加入过 @A3BA3 (( 量草酸使其沉淀，然后用蒸馏水洗涤沉淀 。将沉淀在浓硝酸 中溶解后 ，加热除去多余 的硝 酸 。用 标准溶进行浓度标定，灭菌后备用。氮源选用不同浓度 的