链球菌属的微生物检验分析.docVIP

精品论文 参考文献 链球菌属的微生物检验分析 王春玲 张圣颖 　　（黑龙江省哈尔滨市阿城区疾病预防控制中心 黑龙江 哈尔滨 150000） 　　【摘要】 链球菌是临床常见的致病菌，对链球菌属的检查方法试验方法进行分析。采用标本的直接涂片和分离培养方法进行检查。掌握正确的检验方法，科学地分离鉴定，为临床出作合理的诊断。 　　【关键词】 链球菌属；微生物检验；试验方法 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）16-0391-02 　　链球菌属，亦属化脓性球菌中的一大类常见菌。为链状、单个或成双排列的革兰阳性球菌。分布广泛，存在于人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多不致病。少数可引起人类的化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏性疾病。 　　1.一般资料 　　对微生物实验室接收实验样本70例，其中咽拭子样本6例，痰液样本24例，分泌物16例，穿刺液4例，尿液14例、脑脊液1例，血液培养15例。其中门诊患者样本4例，住院患者样本64例。细菌培养结果：阳性24例，阳性率34.2%，其中链球菌属阳性为2例。 　　2.检查方法 　　标本的直接涂片，革兰染色后镜检，如符合链球菌形态且无正常菌群污染的标本可初报。分离培养，血液标本须先增菌培养；其他标本多采用羊血平板，有利于识别溶血性。初代分离需用5％的CO2、35～37℃环境中孵育24 h观察菌落性状[1]。 　　3.试验方法 　　3.1 溶血性检查 　　溶血性是鉴定球菌最常用的项目，也是鉴定过程中重要的一步。1919年Brown对溶血性进行了描述。 　　3.1.1菌种 　　alpha;溶血或称甲型溶血，在血平板上，菌落周围部分红细胞被破坏，呈现一个草绿色环。beta;溶血或称乙型溶血，在血平板上，菌落周围红细胞完全溶解，呈现一个清楚透明溶血环。gamma;溶血或称丙型溶血，血平板上，菌落周围无红细胞溶解，因而无溶血环。溶血性的识别可在血平板表面菌落周围和穿刺处通过肉眼观察，也可用显微镜观察。除在分离血平板上观察菌落周围的溶血性外，还可用以下方法确认。 　　3.1.2材料 　　羊血平板。 　　3.1.3方法 　　将标本接种于羊血平板上，用接种针在已接种过的血平板上扎2～3处，使细菌被接种到琼脂层深处，35℃环境中孵育过夜。 　　3.1.4观察结果 　　在接种针穿刺过处，羊红细胞完全溶解，形成无色透明区，为beta;溶血。羊红细胞部分溶解呈草绿色的环，为alpha;溶血。羊红细胞不溶解、无溶血环，为gamma;溶血。 　　3.2 Optochin敏感试验 　　3.2.1材料 　　Optochin(ethylhydrocupreine HCL)纸片(直径6mm)，每片含5mu;g。血平板。 　　3.2.2方法 　　挑取被检菌落，涂在血平板上，贴Optochin纸片于接种处，35℃、5％～10％的CO2环境中孵育18h。 　　3.2.3观察结果 　　抑菌环直径ge;14mm为敏感，推断肺炎链球菌。抑菌环直径lt;14mm时参照胆汁溶菌，或为其他草绿色链球菌。 　　3.3 杆菌肽敏感试验 　　3.3.1材料 　　含0.04U／片的杆菌肽纸片，血平板。 　　3.3.2方法 　　挑取被检菌落，密涂于血平板上，接种量应大，以免出假阳性。贴上杆菌肽纸片，35℃环境中过夜[2]。 　　3.3.3观察结果 　　形成抑菌环为敏感，则被检菌推断为A群链球菌。 　　3.4 CAMP试验 　　3.4.1材料 　　血平板，金黄色葡萄球菌ATCC25923。 　　3.4.2方法 　　在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条直线，再将被检菌距金黄色葡萄球菌3mm处垂直接种一短线。用同样方法接种阴性和阳性对照菌。35℃环境中孵育过夜。 　　3.4.3观察结果 　　在被检菌接种线与金葡菌接种线之间有一个矢形(半月形)加强溶血区，此即CAMP试验阳性。阴性无加强溶血区。 　　3.5 胆汁-七叶苷试验(平皿法或斜面法) 　　3.5.1方法 　　接种被检菌1～3个菌落于胆汁-七叶苷试验平板或试管中，置35℃环境中，孵育24～48h。 　　3.5.2观察结果 　　培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性[3]。 　　3.5.3注意事项 　　接种细菌量不能过大。本试验是测定细菌在胆盐中生长情况及同时分解七叶苷的能力，如接种菌量过大，细菌不需要生长而本身固有的酶足以造成七叶苷分解，出现假阳性结果。 　　3.6 七叶苷试验 　　3.6.1方法 　　同胆汁-七叶苷试验：接种被检菌于培养基中，35℃过夜。