阻塞性黄疸患者肝细胞中bcl-2基因的表达及意义.docVIP

精品论文 参考文献 阻塞性黄疸患者肝细胞中bcl-2基因的表达及意义 赖智德 林坦 王仪 王耀东 陈新 (福建医科大学附属省立临床学院即福建省立医院肝胆外科 福建福州 350001) 【摘要】目的 探讨阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡及bcl-2基因表达情况。方法 应用原位DNA末端标记法检测肝细胞凋亡指数，免疫组织化学方法检测bc l-2 基因表达情况。结果 阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡指数及bcl-2基因表达均明显高于无黄疸者。黄疸较轻时，bcl-2基因大量表达，凋亡指数就较低。随着黄疸加深，肝细胞的bcl-2基因表达减弱，凋亡指数就升高。结论 肝细胞凋亡存在于阻塞性黄疸患者肝脏中，阻塞性黄疸患者肝细胞有bcl-2基因表达，bcl-2基因对肝细胞凋亡有抑制作用。 【关键词】阻塞性黄疸 细胞凋亡 肝脏 bcl-2 【中图分类号】R392.12 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）03-0056-02 阻塞性黄疸是外科的常见病症，肝脏是最先受损且损伤最重的器官， 其损害机制尚未完全阐明。近年来细胞凋亡与肝脏疾病的关系逐渐得到重视, bcl-2基因是目前最受关注的与细胞凋亡相关的基因之一。本研究旨在通过研究bcl-2基因在阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡中的表达，以探讨其在阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡中的作用。 1 材料与方法 1.1 病例选择：研究组：选择需手术治疗的阻塞性黄疸患者30例，年龄32-76岁，平均46.6岁，其中良性阻塞：胆总管结石15例；恶性阻塞：肝外胆管癌或胰头癌无肝转移患者15例。对照组：需开腹手术的无黄疸患者15 例。剔除以下患者：病毒性肝炎，药物性肝损害，肝硬化。 1.2 检测患者血清胆红素及肝功能指标（应用美国贝克曼全自动生化仪）。 1.3 术中切取小块肝组织检测肝细胞凋亡指数及相关基因BCL-2的表达: 1.3.1 肝细胞凋亡应用原位DNA末端标记法检测：采用德国宝灵曼公司的TUNEL试剂盒，显微镜下观察细胞核染成棕黄色为阳性细胞，即凋亡细胞。每例切片计数5个400倍视野，以平均每100个细胞中含凋亡细胞个数作为凋亡指数（AI）。 1.3.2 B CL-2的表达检测采用免疫组化方法：BC L-2单克隆抗体购买自武汉博士德公司，结果以细胞浆出现棕黄色颗粒为???性细胞，切片内无阳性细胞为阴性（－）表达，阳性细胞率小于1/3为（+）表达，阳性细胞率1/3～2/3为（++）表达，阳性细胞率大于2/3为（+++）表达。 1.3.3 数据处理：采用SPSS统计软件包进行分析．计量数据以均数plusmn; 标准差（Xplusmn;S）表示，两组间数据比较采用t检验和X2检验，以P＜0.05为有显著性差异。 2 结果 2.1 黄疸组与对照组肝细胞凋亡指数（AI）,b c l-2基因表达检测结果：(见表1.)黄疸组凋亡指数（AI）及b c l-2 基因表达均明显高于对照组， 两组间差异有显著性意义（P＜0.01）。 表1 黄疸组与对照组凋亡指数（AI）,bcl-2基因表达情况 2.2 黄疸的严重程度与凋亡指数、Bcl-2基因表达的关系：黄疸的严重程度分级：血胆红素＜85.5mmo l/l 为轻度，85.5～171mmo l/l为中度， ＞171mmol/l为重度．黄疸的严重程度与凋亡指数(AI)，Bcl-2基因表达的关系见表2。 表2 　黄疸的严重程度与凋亡指数(AI)，Bcl-2基因表达的关系 B c l-2基因表达于肝细胞的胞浆中，呈棕黄色颗粒，胞核不着色． Krusal-Willis检验显示：黄疸程度不同的各组之间肝细胞Bcl-2蛋白的表达 差异有显著性（Plt;0.05），对各组进行Mann-Whitney检验显示：黄疸程度 不同的各组两两之间B c l-2的表达均有显著性差异，即轻度与中度黄疸、重 度黄疸肝细胞B c l-2的表达差异有极显著性（Plt;0.01），中度与重度黄疸肝 细胞B c l-2的表达差异亦有显著性（Plt;0.05），随着黄疸深度加深，凋亡指 数升高，肝细胞Bcl-2蛋白的表达减弱，各组之间的差异有显著性意义。 3 讨论 阻塞性黄疸是临床常见病，其直接结果是肝内胆汁淤积，造成肝细胞损伤。研究表明[1]淤胆时肝细胞坏死并不多见，淤胆时肝脏常见的病理形态改变为出现萎缩变小的肝细胞和嗜酸性小体，这些形态特征符合细胞凋亡的表现。阻塞性黄疸时肝功能损害的机制很可能是由于淤胆的胆盐促进肝细胞凋亡