第五章 ——黄酮类化合物PPT.ppt

极性移动相（含水 溶剂系统）洗脱时 有机溶剂（如氯仿一甲醇）洗脱时 聚酰胺— 非极性固定相 极性固定相 色谱行为 类似反相分配色谱 正相分配色谱 苷极性＞苷元 苷元极性＜苷 苷先洗脱 苷元易洗脱 习题：下列黄酮化合物，（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱， （2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱顺序 3．葡聚糖凝胶柱色谱 分离黄酮类化合物的机理：双重性 分离黄酮苷元——靠吸附作用 羟基少，极性小，吸附力弱，先被洗脱。 分离黄酮苷时——分子筛性质起主导作用 糖数量多，分子量大，先洗脱下来。 常用型号：Sephadex-G，Sephadex-LH20 （二）梯度pH萃取法 ——酸性不同的黄酮苷元的分离 酸性： 7,4’- OH＞7-或 4’-OH＞ 一般Ar-OH ＞5-OH 5%NaHCO3 5%Na2CO2 0.2%NaOH 4%NaOH 溶解 的碱水 （三）根据分子中某些特定官能团进 行分离 H3BO3络合反应（邻二酚羟基） 2. Pb(Ac)2沉淀反应（邻二酚羟基） 3. 碱性醋酸铅（不具邻二酚羟基黄酮） 注意脱铅 A R1=R2=H B R1=H, R2=Rha C R1=Glc, R2=H D R1=Glc, R2=Rha (1) 试比较四种化合物的酸性， (2) 比较极性大小 (3) 比较它们的Rf值大小顺序： 硅胶TLC 聚酰胺TLC 习题：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下： 第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定 测定一般步骤： （1）化学反应— （2）PC、TLC— （3）UV光谱— （4）1H-NMR （5）MS （6）13C-NMR 一 化学反应——确定化合物的类别 二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用 ——确定黄酮的种类与数量 （一）纸色谱（PC）—— 分离黄酮类化合物及其苷的混合物 1．原理— 分配色谱 类别 性质 黄酮、黄酮醇及其苷 二氢黄酮、二氢黄酮醇及其苷 异黄酮 查耳酮 花色素 颜色 灰黄～黄 无色 微黄 黄～橙黄 随PH不同而改变 旋光性 苷元：无 苷：有 苷元及苷均有 苷元：无 苷：有 苷元：无 苷：有 苷元：无 苷：有 水溶性 平面型分子，分子间引力大，溶解性差 非平面分子，溶解性较黄酮类好 溶解性一般较差 溶解性较异黄酮好 水溶性 荧光 有荧光，多为黄色～橙色 三、酸性与碱性 （一）酸性 黄酮酚羟基酸性强弱顺序依次为： 7,4’-二OH＞7-或4’-OH＞一般酚羟基＞5-OH 应用: 用于提取、分离及鉴定工作 插烯酸 羟基位置 酸性 溶解性 7，4＇-二羟基 7或4＇-羟基 一般酚羟基 5-羟基 强 弱 溶于5%NaHCO3溶液 溶于5%Na2CO3溶液 溶于0.2%NaOH溶液 溶于4%NaOH溶液 （二）碱性——强酸下形成钅羊盐 γ-吡喃环上的1-氧原子，因有未共用 的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无 机酸生成盐，但生成的盐极不稳定，加水 后即可分解。钅羊盐常常表现出特殊的颜色，可用于鉴别。 四、呈色反应 （一）还原试验——鉴别 1．盐酸-镁粉（或锌粉）反应 黄酮（醇） ———橙红～紫红色 二氢黄酮（醇） 查耳酮、橙酮、儿茶素（-） 异黄酮类除少数例外，也不显色 操作：样品/乙醇中加入少许镁粉振摇，滴加 几滴浓HCl，即可显色。 排除干扰 ：先作空白对照实验 Mg粉 上述四种黄酮 HCl 无色 红色 注意: 花色素、部分橙酮、查耳酮类在浓HCl中产生颜色。必要时,可不加镁粉作一空白对照。 2．四氢硼钠反应 ——区别二氢黄酮类 二氢黄酮类/EtOH 2％NaBH4/MeOH 浓HCl 红～紫色 （二）金属盐类试剂的络合反应 —C3-OH，C5-OH，邻二OH（+） 络合应具备的条件 结果：颜色，沉淀 用途：鉴定，结构测定，提取分离 1. 铝盐 1％AlCl3溶液，络合物多为黄色，为显色剂和比色测定。 2. 铅盐 常用1％醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，可生成沉淀。中性醋酸铅只能与分子中具有邻二酚羟基或兼有3-OH,4-酮基或5-OH,4-酮基的化合物产生沉淀。 应用：鉴定、提取及分离工作。 3．ZrOCl2（锆盐） 5-OH黄酮类 3-OH 2%枸橼酸