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细胞工程-第八章___植物种质保存.ppt

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第八章 植物种质保存 第一节 种质资源保存类型 一、概念 种质:是决定生物遗传性状,并将遗传信 息从亲代传递给子代的遗传物质。 种质库:是指以种为单位的群体内的全部 遗传物质,它有许多个体的不同 基因所组成。又称基因库。 种质资源:具有种质并能繁殖的生物体统 称为种质资源或遗传资源。 ;二、种质保存的意义 随着经济发展,地球不断开发及生态环境破坏,每年都有多个物种消失或濒临灭绝。各种植物,包括栽培种、野生种甚至杂草,都具有各自独特的优良基因,是植物品种改良乃至农业可持续发展的基础。它们是经过长期进化而来,一旦失去不会再来。因此,世界各国都很重视植物种质资源的收集与保存的研究。 ;三、种质保存的方法 按保存的地理位置分为原地保存和异地保存 。原地保存是在原来的生态环境条件下 , 就地保存 , 自我繁殖品种资源 , 一般野生品种资源采用这种方式保存 , 如建立自然保护区 , 天然公园等;异地保存是将种子或植株保存于该品种资源原产地以外的地区 , 这种保存可采用植物园、种质园、种质库等形式或采用试管保存形式。 按照保存的具体方法 , 品种资源的保存可分为种植保存、贮藏保存、试管保存、基因文库保存。 ; ;; ;; 第二节 试管保存 一、常温下试管保存 可利用试管苗继代培养保存,但需要经常更换培养基。 ;二、常温抑制生长保存 为了延缓继代时间,可在培养基中添加长抑制剂或提高渗透压等。如脱落酸(ABA)、矮壮素(2-氯乙基三甲基氯化按,简称CCC)、二甲氨基琥珀酸酰胺(简称B9)、多效唑(PP333)等都是生长抑制物质,培养基中添加一定量可以延缓生长。一般情况下几个月继代一次,而添加这些物质后,可达到一年甚至以上。 提高培养基渗透压也可以延缓生长。可用蔗糖或甘露醇,浓度分别调到10%左右和4%—6%。 ;三、中低温调控生长保存 在试管苗继代培养过程,适当降低温度,也能延缓生长,延长继代时间。一般植物可调到1—9℃,热带、亚热带植物调至10—20℃。 ;四、常温抑制生长保存与中低温调控生长保存相结合 培养基中添加生长抑制剂或提高渗透压,培养温度降低,使继代时间延长。 ; 第三节 超低温保存Cryopreservation 一、超低温保存的基本原理和主要环节 在液氮中(-196℃),几乎所有的细胞代谢活动停止,仅保存细胞的活力和形态发生的潜力。当解冻后,能够恢复再生能力。 超低温保存比较复杂,哪一步操作不当,都会使细胞受伤害,失去再生能力。 注:超低温通常指低于一 80 ℃的低温,保存介质或容器有干冰(一 79℃)、超低温冰箱(-80-150 ℃)、液氮(-196℃)和液氮蒸气相(-140℃)等,其中液氮最常用。;;二、超低温保存技术 1、保存材料的选择 2、冷冻前材料预处理 3、添加冷冻防护剂 4、材料冷冻的方法(预冷) 5、材料保存 6、保存材料解冻 7、保存材料复苏培养 ;1、保存材料的选择 花粉、茎尖分生组织、芽、种胚、小植株、愈伤组织、体细胞胚等均可以作为保存材料。 ;2、冷冻前材料预处理 为了使保存材料适应超低温条件,必须进行预处理。 预处理方法:将保存材料放在高糖浓度、添加二甲基亚砜(DMSO)、脯氨酸,在接近零度下培养数日。 ;3、添加冷冻防护剂 为了抵抗冻害,使用冷冻防护剂。常用的冷冻防护剂有:二甲基亚砜(DMSO)、甘油、脯氨酸、糖类、乙二醇、二甘醇、乙酰胺、福美氧化硫等。 ;4、材料冷冻的方法 材料冷冻保存的原理:冷冻时,细胞外的溶液水分子,先形成冰晶中心,而冰晶形成的速度与溶液成分、降温速度有关。一般在-20℃—-60℃范围内,晶体中心增长最快,形成大块冰晶体之后,慢慢减速,到-140℃时完全停止增长。 ;4、冷冻处理 (1)快速冷冻 将植物材料从0℃ 或者其它预处理温度直接投入液氮中保存的方法。降温速度为1000 ℃/min。植物体内的水分在降温冷冻过程中,从-10℃—-140℃范围内是冰晶形成和增长的危险温度区,到-140℃时完全停止增长,关键是利用高速降温越过冰晶增长的危险温度区,不能形成致死的冰晶,细胞内水分固化,不会破坏细胞结构。 ;(2)慢速冷冻法 将植物材料从0℃ 或者其它预处理温度以降温速度为1~2 ℃/min从起始温度降到-100 ℃ ,稳定1h后投入液氮中保存或以此降温速度降至-196 ℃。 在这种降温速度下,细胞内水分有充分的时

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