杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用 Development and application of real-time PCR assay for detecion of Aeromonas salmonicida.pdfVIP

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杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用 Development and application of real-time PCR assay for detecion of Aeromonas salmonicida

第29卷第5期 海洋水产研究 V01.29.No.5 . 20 08年10月 MARlNEFISHERIESRESEARCH Oct.,2008 杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用 刘宗晓1 刘 荭2’ 史秀杰2 高隆英2 岳志芹3 吕建强2 何俊强2 江育林2 谢从新 (1华中农业大学水产学院,武汉430070) (2深圳出入境检验检疫局,518001) (3山东出入境检验检疫局,青岛266002) 摘要 2.0软件设计引物 选取杀鲑气单胞茵A层A蛋白(VapA)保守序列,利用PrimerExpress 和探针。以ATCC标准株10倍系列稀释,通过血球计数板计数后进行实时定量PCR,制作标准曲 线。通过SDS软件获得细菌数量(X)与Cz值的关系为:Ct=一3.1571(相关系数 4lgX+43.684 R2=0.992)。实时定量PCR的检测限为6个细茵。建立的方法对杀鲑气单胞茵典型株和非典型株 具有较好的特异性,与其他细菌没有交叉反应。杀鲑气单胞茵实时定量PCR方法的建立,对于快速 口岸检疫、临床诊断和疫痛监测具有重要的应用价值。 关键词 杀鲑气单胞菌 实时定量PCRTaqman探针 文献识别码A 中图分类号Q93-332;$945 and ofreal--timePCR Developmentapplication assay fordetecionofAeromonassalmonicida LIU LIU SHI GAO YUE Zong—xia01Hon92’ Xiu-jie2 Long—yin92Zhi—qin3 LO HE Yu—lin2XIE JIANG Cong—xinl Jian—qian92Jun—qian92 (1Fishery of Agricultural CollegeHuazhong University,430070) (2Shenzhen andQuarantineBureau,Shenzhen,518001) EntryExitInspection (3 andQuarantine ShandongEntryExitInspection Bureau,Qingdao,266002) A thedetectionofAeromonassalmonicidabasedon ABSTRACTmethodwasestablishedfor real—time chain of anda quantitivepolymerasereaction(qPCR).ApairprimersTaqmanprobe

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