第二章 固定化酶(4~6节) 酶工程课件.pptVIP

Enzyme Engineering酶工程 第三章 固定化酶 第一节 概述 第二节 固定化酶的性质及其影响因素 第三节 固定化酶的制备 第四节 固定化细胞 第五节 固定化辅酶和原生质体 第六节 酶反应器和固定化酶（细胞）的应用 第四节 微生物、植物和动物细胞固定化 细胞特性比较 一. 固定化细胞的特点 概念:固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞称为固定化细胞.该细胞能进行正常的生长、繁殖和新陈代谢，又称固定化活细胞或固定化增殖细胞。 类型：微生物细胞、植物细胞、动物细胞 生理状态：死细胞（完整细胞、细胞碎片、细胞器） 活细胞（增殖细胞、静止细胞、完整细胞） 形状：颗粒状、块状、条状、薄膜状或不规则形状。 最多使用：颗粒状珠体 使用周期：理论上讲，固定化增殖细胞保持了细胞原有的全部活性， 只要载体不解体，不污染就可以长期使用。 二. 固定化细胞的优缺点 优点 (1)省去了酶的分离手续．为多酶系统，无须辅因子再生。 (2)细胞生长快、而且多、反应快。 (3)可以连续发酵，节约了成本，而且在蒸馏和提取前不用分离去细胞，能一边排出发酵液，一边进行培养，排除了产物抑制和消耗 (4)保持酶在细胞内的原始状况，增加了酶的稳定、特别是对污染因子的抵抗力增加。 二. 固定化细胞的优缺点 缺点 (1)必须保持菌体的完整，防止菌体自溶，否则，将影响产品纯度。 (2)必须防止细胞内蛋白酶对所需酶的分解，同时，需抑制胞内其他酶的活性止副产物的形成。 (3)细胞膜、壁会阻碍底物渗透和扩散。 二. 细胞固定化方法 吸附法 包埋法 1.吸附法 它主要通过载体与细胞间的静电引力，即细胞表面与载体之间范德华作用力，离子键和氢键作用力，才使细胞固定在载体上的。 影响吸附法的主要因素 （1）Z-电位： Z-电位能近似地代表表面电荷密度的大小 （2）细胞的性质和细胞壁的组成：细胞壁的电荷性质 （3）载体的性质：特别是玻璃、陶瓷等无机材料 2.包埋固定法 包理法是在细胞自身并不与凝胶基体发生化学键合的情况下将其包埋在半透性聚合物颗粒（或膜）内的一种固定化方法。包埋法的最大优点是能较好的保持细胞内多酶系统的活力，可象游离细胞那样进行产物的发酵生产。 常用载体：琼脂、海藻酸钙、角叉菜胶、明胶、聚丙烯酰胺 常用凝胶包埋法 举例海藻酸钙包埋法 基本原理是：称取一定量的海藻酸钠配成水溶液，经杀菌冷却后，与一定体积的细胞或孢子悬浮液混合均匀，然后用注射器或滴管将冷悬液滴入一定浓度的凝固浴中（常用CaCl2 溶液），形成球状固定化细胞 研究热点——光交联树脂包埋法 例：相对分子量为1000-3000的光交联聚氨酯预聚物等，加入1%左右的光敏剂，加水配成一定浓度，加热至50℃，然后与一定浓度的细胞悬浮液混合均匀，摊成一定厚度的薄层，用紫外照射3min，就可制得 三. 固定化细胞的目的 微生物菌体：不需多次培养、扩大，从而缩短了发酵生产周期 植物细胞 动物细胞 第四节结束 点击返回 第五节 固定化原生质体和辅酶 一. 原生质体的制备 二. 原生质体的固定化 三. 辅酶固定化 一. 原生质体的制备 将对数生长期的细胞收集——悬浮在含有渗透压稳定剂的高渗缓冲液中——加入水解酶——分离——得到原生质体 二. 原生质体的固定化 将原生质体制备好后，把离心收集到的原生质体重新悬浮在含有渗透压稳定剂的缓冲液中，配成一定浓度的原生质体悬浮液，然后采用包埋法制成固定化原生质体。 三 辅酶固定化 1 原因 有机辅因子中具有某些特殊的化学基团，参与酶的催化反应 有机辅因子在使用过程中要流失，并且不能自行再生 有机辅因子价格昂贵 ——工业上应用全酶的关键是有机辅因子的保留和再生 2 固定化方法与酶相似，一般采用溴化氰法，碳二亚胺法以及重氮偶联法等共价偶联，或将其进行适当的化学修饰后固定在超滤器中。 3 辅酶固定化必须解决辅酶在多个酶之间传递的障碍。 辅酶的固定化 辅酶的固定化方法 辅酶固定化的形式： 第五节结束 点击返回 第六节 酶反应器和固定化酶（细胞）的应用 酶反应器介绍 反应器选择的依据 反应器和酶稳定性 固定化酶和细胞的应用（工农业、医药、分析化学、酶电极、亲和色谱、环境保护、能源开发、基础理论研究） 生物催化反应器工程 一．酶反应器。 1． 分批搅拌反应器。 2． 连续流搅拌桶反应器。 3． 连续搅拌桶-超滤反应器 4． 填充床反应器 5． 循环反应器 6． 流化床反应器 1． 分批搅拌反应器 反应器结构简单，不需要特殊装置，适与小规模试验 2． 连续流搅拌桶反应器 连续搅拌釜式反应器 3． 连续搅拌桶-超滤反应器 4． 填充床反应器