用于重组抗体生产的细胞大规模培养技术.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（７）：１０３１１１ 用于重组抗体生产的细胞大规模培养技术 刘伯宁 （华北制药集团新药研究开发有限责任公司抗体药物研制国家重点实验室　石家庄０５００１５） 摘要　近年来，用于单抗药物生产的动物细胞大规模培养技术发展迅速。此领域的技术进展集 中在个性化培养基开发，工艺条件优化等方面。本文总结了用于提高重组抗体表达水平的常用 方法，以及细胞培养工艺对抗体药物“关键质量属性”（聚体、降解、糖基化修饰、电荷变异等）的诸 多影响。此外，细胞培养工艺在产业化过程面临着工艺放大与技术转移，定性研究与工艺验证等 实际问题。未来大规模细胞培养工艺的开发，将进一步借助动物细胞的组学研究成果和新兴的 “过程分析技术”。 关键词　重组抗体　细胞大规模培养　培养基优化　工艺开发 中图分类号　Ｑ５１１ 　　目前，多种表达系统均可实现重组抗体的异源表 ｐＨ，ＤＯ，ＤＣＯ 等）、培养基的营养成分（葡萄 数（温度， ２ 达，但是抗体药物的产业化制备，始终以动物细胞大规 糖、谷氨酰胺、氨基酸、维生素等）的消耗，以及自身代 ［１］ ＴＭ 谢产物（乳酸、氨、重组蛋白等）的积累与生理生化参数 模培养工艺为主 。１９８６年首个治疗性抗体 ＯＫＴ３ 上市之初，动物细胞表达水平普遍不足１００ｍｇ／Ｌ。经过 （细胞密度、活性，能荷等）的变化。作为重组抗体生产 近三十年间发展，业内用于重组抗体生产的动物细胞 的“细胞工厂”，上述过程参数的改变会直接影响生产 培养工艺，无论细胞培养密度，还是抗体表达水平均提 细胞系的活性与重组抗体的收率。比如：当乳酸 （ 高五十倍以上。流加培养工艺中细胞密度可达１～２× ５８ｍｍｏｌ／Ｌ）、渗透压（３８２ｍＯｓｍ／ｋｇ）、氨（５．１ｍｍｏｌ／Ｌ） ７ 参数超过其相应的阈值，细胞活性和抗体产量均会明 １０ｃｅｌｌ／ｍＬ，日均产量 ２００ｍｇ／Ｌ／ｄａｙ以上（最高可达 ［６］ ７００ｍｇ／Ｌ／Ｄ），最终收液的容积产率可达３～５ｇ／Ｌ（最高 显下降 。目前，业内已经对于细胞培养过程参数进 ［２］ 行了深入的研究，在动物细胞大规模培养中下述参数 达 １３ｇ／Ｌ ），培 养 体 积 可 至 ２００００Ｌ（Ｌｏｎｚａ， ［３］ 的控制也已成定式（见表１）。 Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ／ＮＨ—ｆａｃｉｌｉｔｙ） ；灌注培养工艺中细胞密度 ８ １．１　流加培养方式及优化策略 可达２×１０ｃｅｌｌ／ｍｌ，抗体容积产率最高达２５～４０ｇ／Ｌ ＴＭ ＴＭ ［４］ 　　目前上市的重组抗体中绝大多数（如：Ｅｎｂｒｅｌ， （Ｐｅｒｃｉｖｉａ公司ＸＤ 灌注系统 ）。以上行业技术水平 ＴＭ ＴＭ ＴＭ ［５］ Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ ，Ｒｉｔｕｘａｎ ，Ｓｙｎａｇｉｓ ）是采用流加 （ｆｅｄ 的飞速提升，既源于上游细胞系构建技术的突破 ，也 ｂａｔｃｈ）