糖基转移酶反应的基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法监测.pdfVIP

糖基转移酶反应的基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法监测 周大炜1,2,3 刘斌1,2,3吴俊丽1,2,3胡波1齐源远1 1.南开大学泰达生物技术学院，天津300457;2.天津市微生物功能基因组学重点实验室，天津300457； 3.南开大学分子微生物学与技术教育部重点实验室，天津300457 摘要：以wabD（大肠杆菌O77中O抗原基因簇内）编码的α-1，3-甘露糖转移酶、wfgD（大肠杆菌O152中O 抗原基因簇内）编码的β-1，3-葡萄糖转移酶和ωfeD（志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内）编码的β-1，4- 半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象，尝试应用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电 离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的糖基转移酶监测方法。该方法首先直接用质谱 分析0.3μL未经色谱分离、除盐处理的反应混合物，随后应用CID串联质谱技术对酶活反应产物进行结构 表征，实现酶活反应的快速检测。研究结果表明，CIDMALDI-TOFMS平台适用于新建克隆的糖基转移酶 酶活反应的监测，与现有的高通量方法相比，在速度、灵敏度、重现性、自动化和溶剂消耗方面具有绝对 优势。 脂寡糖；糖基转移酶；基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱( MALDI-TOF MS) O657.63 A 1004-2997(2011)04-0193-07 Monitoring of Glycosyltransferase Reactions by MALDI-TOF Mass Spectrometry ZHOU Da-wei LIU Bin WU Jun-li HU BoQI Yuan-yuan 2010-11-30 2011-03-09 南开大学引进人才科研启动资金(No. J02006)资助 周大炜(1966～)，女（汉族），吉林通化人，副研究员，功能基因组学专业。E-mail: daweizhou@nankai. edu. cn 194 195 196 197 @@[1] BATCHELOR R A, HARAGUCHI G E, HULL R A, et al. Regulation by a novel protein of the bimodal distribution of lipopolysaccharide in the outer membrane of Escherichia coli[J]. J Bacteri ol, 1991, 173(18): 5699-5704. @@[2] YI W, YAO Q, ZHANG Y, et al. The wbnH (12): 1849-1855. gene of Escherichia coli O86 : H2 encodes an alpha @@[6] BROCKHAUSEN I, HU B, LIU B, et al. Char 1,3-N-acetylgalactosaminyl transferase involved in acterization of twoβ-1,3-glucosyltransferases from the O-repeating unit biosynthesis [J]. Bioch