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第27卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第3期 Chinese of 1999年3月 Journal 29r7～299 AnalyticalChemistry 长白山白眉蝮蛇蛇毒酶的基质辅助激光解吸质谱分析 孙明忠 季怡萍 丁 兰 赵大庆。 倪嘉缵 (中国科学院长春应用化学研究所稀土化学与物理开放实验室，长春130022) 种主要酶：磷脂酶A2、精氨酸酯酶、纤溶酶及￡．氨基酸氧化酶进行了纯度鉴定和分子量测定， 结果表明MALDI—TO-FMS具有灵敏度高、分辨能力强、分析时间短及样品用量少等优点。用 电泳所无法比拟的。 关键词基质辅助，激光解吸质谱，白眉蝮蛇，酶 1 引 言 蛇毒是自然界中最丰富、最集中的酶源之一，其组成蛋白质半数以上是具有各种催化活性 的酶类，迄今为止人们已从蛇毒中发现了近40种酶…。采用常压层析的方式，从长白山眉蝮 明该酶由两个不相等亚基组成。 自Karas和Hillonkamp【2 法由于特有的高灵敏性、测量质量范围宽(300 大分子H’5]，用该法对蛇毒组分的研究较多∞圳，但蛇毒酶类提纯困难，因此对单一组分的分析 报道较少。 2实验部分 2．1样品制备 P迅：粗毒经DEAE—SephadexA．50(A一50)，Scphadex A．50，G75(2次)，A．50(1—2次)得到。 2．2仪器与实验条件 LDI．1700激光解吸电离飞行时间质谱仪(Linear nln，脉 冲宽度3ns，真空度1．3×10～Pa，加速电压30kV，吸引电压9．3kV，检测器电压一4．75kV，质 2．3实验方法 ’ 二次水配制浓度O．50 g／L的酶液，取10止酶液置于样品杯中，加入等体积芥子酸(基质) 混匀。再吸取2止此溶液，滴于样品探头靶心上，抽空除去溶剂，结晶后快速送人离子源进行 检测，质量范围m／z0～100kDa。 1998-05-22收稿；1998—09．07接受。 本文系吉林省科委资助项目。 298 分析化学 第27卷 3结果与讨论 3．1 眦的MALDI-TOFMS kDa可知，m／z 6995．3和m／z28127．3峰分别 14008．0质谱峰为P峨质子化分子离子峰即[M+H]+峰，m／z H]+等一系列相关的多聚体峰。 3．2 Fibrolase的MAL】DI．TOF．MS 图2为fibmlase的MALDI—TOF．MS，其中m／z m／。11751．9和m／z 的存在。 一 零 一 、_， 零 8 一 写 S q C 皇 = 奄 ．。