miR-203a和miR-203b基因在食管鳞状细胞癌中表达及其甲基化状态分析-硕士毕业大论文终结版.doc

No. 河 北 医 科 大 学 硕士研究生毕业论文 miR-203a和miR-203b基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态 研 究 生 梁 佳 导师 郭 炜 教 授 董稚明 教 授 专业 病理学与病理生理学 二级学院 河北医科大学第四医院 研究起止日期 2013年9月-2015年3月 交稿日期 2015年3月 目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………………………………………………………………………9 研究论文 miR-203a和miR-203b基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化分析 前言………………………………………………………………… 材料与方法………………………………………………………结果………………………………………………………………附图………………………………………………………………附表………………………………………………………………讨论………………………………………………………………结论………………………………………………………………参考文献……………………………………………………………综述 miR-203a…………………………………………43 致谢……………………………………………………………………个人简历……………………………………………………………… miR-203a和miR-203b基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态 摘 要 目的：食管癌是发生在食管粘膜上皮的恶性肿瘤，根据食管癌的组织学特点可分为五种类型，其中食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC），大约占9%，食管腺癌（esophageal adenocarcinoma, EA）次之，占7%左右，其他几种类型均少见。我国是世界上食管癌发生率和病死率较高的国家之一，同时食管癌预后差，晚期患者生存率。然而目前为止，食管癌的发病机制尚不。 miR-203a和miR-203b表达及其探讨miR-203a和miR-203b甲基化与食管癌发生、发展的关系，从而为食管癌发病的分子机制、治疗方案及其预后等方面提供新的理论依据。方法：1 应用实时定量RT-PCR（Quantitative real-time RT-PCR, qRT-PCR）方法检测应用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-dC）处理前后的食管癌细胞系（TE1、TE13、YES-2、Ec109和T.TN）和54例食管鳞癌组织及其相应的癌旁组织中miR-203a和miR-203b基因的表达。2 应用甲基化特异性PCR（methylation specific polymerase chain reaction, MSP）方法检测应用5-aza-dC处理前后的食管癌细胞系和83例食管鳞癌组织及其相应的癌旁组织中miR-203a和miR-203b基因的甲基化状态。3 运用统计软件SPSS19.0对数据进行统计学分析。 结果：1 miR-203a基因在食管癌中的表达及甲基化1.1 食管癌细胞系中miR-203a基因的表达及甲基化状态未经5-za-dC处理，五种食管癌细胞中miR-203a基因的表达均相对较低，且呈高甲基化状态；5-za-dC处理后，miR-203a基因的表达均显著升高（均P＜0.05），YES-2细胞中miR-203基因甲基化程度显著降低，其余4种食管癌细胞系中miR-203a基因非甲基化状态。1.2 食管癌组织中miR-203a基因的表达miR-203a基因在食管癌和其相应的癌旁组织的表达量分别为0.253±0.099和0.481±0.189，食管癌组织miR-203a基因的表达量明显低于其相应的癌旁组织，两者的差异有统计学意义（t=-14.137，P=0.000）。在食管鳞癌患者中, miR-203a的表达与肿瘤组织的肿瘤分期和分化程度有关（P0.05），而与患者的年龄、性别和淋巴结转移无关（P0.05）。1.3 食管癌组织中miR-203a基因甲基化状态的研究miR-203a基因启动子区在食管鳞癌组织和其相应的癌旁组织的甲基化率分别62.7%（52/83）和7.2%（6/83）。食管鳞癌组织中miR-203a基因启动子区甲基化发生率明显高于其相应的癌旁组织（χ2=3.918，P=0.048）。miR-203a基因在低分化鳞癌组中甲基化发生率75.0%（33/44）明显高于中高分化鳞癌组甲基化发生率48.7%（19/39）（χ2=6.103，P=0.013）；Ⅲ期和Ⅳ期miR-203a基因启动子区的甲基化发