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CD164对胶质瘤细胞生长的影响研究 　　摘要：目的 研究CD164在胶质瘤组织及细胞系中的表达，以及对体外胶质瘤细胞增殖的作用。方法 采用qRT-PCR分析CD164在45例胶质瘤组织和正常脑组织中的表达，利用western blot检测CD164在人胶质瘤细胞株SF295、SHG-44、U87和U251以及人正常星形胶质细胞系NHA中的表达；构建沉默CD164的慢病毒载体，并将其感染至胶质瘤细胞株U251，CCK-8法检测细胞增殖；western blot法检测感染CD164 shRNA后对U251细胞中PTEN蛋白表达的影响。结果 CD164在胶质瘤组织的表达较正常脑组织显著上调，差异有统计学（P 　　关键词：胶质瘤；CD164；PTEN；增殖 　　中图分类号：R739.41 文献标识码：A 文章编号：1006-1959（2017）22-0029-04 　　Abstract：Objective To investigate the expression of CD164 in glioma tissues and cell lines，and the effects on glioma cell proliferation in vitro. Methods The expression of qRT-PCR of CD164 in 45 cases of glioma tissues and normal brain tissues，using western blot to detect CD164 in the human glioma cell lines SF295，SHG-44，U87 and U251 and the expression of the normal astrocyte cell line NHA；lentiviral vector construction of CD164 silencing，and the infection to U251 glioma cell line，cell proliferation was detected by CCK-8；CD164 shRNA western blot infection detection method of U251 cells PTEN protein expression.Results The expression of CD164 in glioma compared with normal brain tissue the organization was significantly increased，the difference was statistically（P 　　1.2 mRNA的提取及检测 　　mRNA的提取实验步骤严格按照miRNA提取试剂盒操作步骤进行。CD164上游引物序列为：5′- GCTTCGCCAATTTGGGGTTG -3′，下游引物序列为5′-TATCCATCATTGTCGAATGTGT-3′，内参U6上游引物序列为：5′- CCTCTTAGATCACTATGGCAG-3′，下游引物序列为5′- GTTATTGAGCCATGGTTCGG-3′。依照PrimeScriptTMRT-PCR试剂盒根据制造商的指示，cDNA经反转录生成。对mRNA进行定量分析检测步骤如下：95 °C温度下2 min，然后在95 °C温度下反应45 s和60 °C温度下反应60 s，持续30个循环，每个样本检测3次，通过2-△△Ct的方法计算CD164 mRNA的相对表达差异倍数，实验重复3次。 　　1.3试剂 　　Opti-MEM培养基、DMEM培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司； Trizol试剂和Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司；shRNA NC和CD164 shRNA购自中国GenePharma；miRNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、RT-PCR 试剂盒和细胞蛋白提取试剂盒购自日本TaKaRa株式会社；CCK-8试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；PTEN和β-actin抗体购自美国Epitomics公司。 　　1.4细胞培养 　　人胚肾细胞株HEK-293T、胶质瘤细胞株SF295、SHG-44、U251和U251及人正常胶质细胞NHA细胞均由上海细胞生物研究所提供。细胞培养于DMEM培养基中，培养基中补充10%胎牛血清、青霉素（100 U/μl）和链霉素（100 μg/ml）。细胞在37 ℃且CO2 含量约为5%的细胞培养箱内进行培养。当细胞生长至占培养瓶底面积90%以上时用胰蛋白酶消化并用于实验。 　　1.5 构建慢病毒载体感染U251细胞