蛋白激酶a介导酒精引起的神经元中sim2的表达word论文.docxVIP

英文缩略词表Sim2Single-minded2CNScentralnervoussystemDSDownsyndromeADAlzheimer’sdiseaseP7postnataldaysevenPKAproteinkinaseA7-AAD7-amino-actinomycinDFskforskolinA-DActinomycin-DNeuNNeuronalNuclei中文摘要目的：在中枢神经系统发育过程中，胎儿酒精暴露会引起大量的神经元凋亡，导致认知障碍，记忆力下降。然而，酒精引起神经元凋亡的作用机制尚待进一步研究。已有研究表明，转录抑制因子Single-minded2(Sim2)参与唐氏综合征(DS)和阿尔兹海默病（AD）等学习记忆障碍性疾病的发生；而且Sim2 的过表达会引起神经元损伤。然而，Sim2 是否参与了酒精介导的神经元损伤，以及在此过程中是何信号通路调控Sim2 的表达，并最终导致神经元功能失调，尚待阐明。方法：在细胞水平及动物模型上研究酒精对Sim2 表达及神经元损伤的作用。采用WesternBlot 检测不同浓度的酒精（50mM和100mM）处理下人的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y和原代大鼠皮质神经元中Sim2及cleavedcaspase3的蛋白表达水平；探讨Sim2 在酒精所致神经元损伤中的作用。在此基础上，干预Sim2的表达，进一步明确其作用。同时使用出生后七天（P7）的C57BL/6 小鼠颈部皮下注射20％的酒精（2.5 g/kg）建立胎儿酒精暴露动物模型；在酒精处理前皮下注射蛋白激酶A抑制剂H-89，用WesternBlot和免疫荧光双标法探讨PKA信号通路抑制剂对酒精所致Sim2 表达和神经元损伤的影响。结果：1.酒精能够在细胞水平和动物水平增加Sim2及cleavedcaspase3的蛋白表达：在SH-SY5Y细胞和原代培养神经元中，分别使用50mM和100mM的酒精处理细胞，与对照组相比，酒精处理不同时间（12,24,48h）均可增加Sim2及cleavedcaspase3的蛋白表达（P0.05），并且两者的表达趋势一致。在酒精暴露小鼠模型皮质中，与溶媒对照组相比，酒精显著增加Sim2及cleavedcaspase3的蛋白表达（P0.05）；并且免疫荧光结果显示，与对照组相比，酒精增加的Sim2主要表达在神经元。2.Sim2shRNA慢病毒可沉默Sim2的表达并显著降低cleavedcaspase3的蛋白水平：使用Sim2shRNA慢病毒处理SH-SY5Y细胞，与ScrshRNA组相比，Sim2shRNA可显著降低酒精所致的Sim2及cleavedcaspase3的蛋白表达（P0.05）；2而ScrshRNA不能反转酒精所致的Sim2及cleavedcaspase3的表达。3.酒精通过激活PKA信号通路引起Sim2和cleavedcaspase3蛋白表达增加：在SH-SY5Y细胞中，H-89（PKA信号通路抑制剂）可显著减少酒精引起的Sim2的表达（P0.05）；与对照组相比，Fsk（腺苷酸环化酶激活剂）可显著增加Sim2的表达（P0.05）。在动物模型中，H-89可显著降低酒精引起的大脑皮质中Sim2和cleavedcaspase3的蛋白表达（P0.05）。结论：酒精通过激活PKA促进Sim2表达，进而引起细胞凋亡。关键词：酒精；Sim2；蛋白激酶A；cleavedcaspase3；3AbstractObjective:Prenatalethanolexposurecancauseextensiveapoptoticneurodegenerationthroughoutthedevelopingcentralnervoussystem(CNS),whichresultsincognitivedeficitsanddeclineinmemory.However,theunderlyingmechanismsofthiseffectremaintobefurtherstudied.IthasbeenreportedthatSingle-minded2(Sim2),atranscriptionalrepressor,isinvolvedindiseaseswhichimpairlearningandmemorysuchasDownsyndrome(DS)andAlzheimer’sdisease（AD）.Moreover,theoverexpressionofSim2couldimpairneurons.Therefore,weexploredthatwhethersim2involvedinregulatingethanol-mediatedneuroninjury，wh