肺心汤含药血清对离体培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和低氧诱导因子脯氨酸羟化酶的影响word论文.docxVIP

RT-PCRReverse transcriptase Polymerase Chain reaction逆转录酶-聚合酶链反应HPHhypoxic pulmonaryhypertension低氧性肺动脉高压LIMD1LIM domain-containingprotein 1抑癌基因VHLvonHippie—Lindau肿瘤抑制因子ODDDoxygen dependentdegradation domain氧依赖降解结构域2肺心汤含药血清对离体培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和低氧诱导因子脯氨酸羟化酶的影响研究生李 敏导师戴爱国教授中文摘要【目的】研究肺心汤含药血清对体外缺氧环境下大鼠原代肺动脉平滑肌细胞中 PHDs-HIF-1α 信号分子表达的影响，探索肺心汤含药血清与对缺氧下大鼠肺动脉 平滑肌细胞增殖的关系。【方法】细胞增殖部分：组织贴壁法培养大鼠原代肺动脉平滑肌细胞，MTT 法、 EDU 标记法检测不同浓度 FXD 含药血清对缺氧处理（1% O2、94% N2 和 5%CO2） 24h 后大鼠 PAMSC 增殖情况。基因表达部分：Western-blot 检测不同缺氧时间（2h、4h、6h、12h、24h）下 HIF-1α 的蛋白表达；选用 HIF-1α 表达量最高一组的时间 点作为后续时间点检测常氧组、缺氧模型组、缺氧+FXD 含药血清组，缺氧+硝苯 地平组 PHDs、HIF-1α 蛋白和 mRNA 的表达。【结果】.肺心汤含药血清可抑制体外缺氧处理 24h 后大鼠 PASMC 的增殖，且呈剂量依赖 性。.不同缺氧时间点对 HIF-1α 蛋白表达的影响 Western Blot 结果显示：随着缺氧时 间的延长，HIF-1α 的蛋白表达量呈递增趋势，缺氧 12h 组达到高峰值，高于缺氧 2h 组（P＜0.05），缺氧 24h 组维持高水平。.缺氧处理 12h 对大鼠 PASMC 中 HIF-1α、PHDs 蛋白表达的影响 Western Blot 结果显示：与正常对照组比较，缺氧模型组、缺氧+FXD 组、缺氧+硝苯地平组 HIF-1a、PHD3 蛋白表达水平明显增加（P ＜0.01）。.缺氧处理 12h 对大鼠 PASMC 中 HIF-1α、PHDs mRNA 表达的影响 RT-PCR 结 果显示：与正常对照组比较，缺氧模型组 HIF-1a、PHD2、PHD3 mRNA 表达水平 明显增加（P ＜0.01）。.肺心汤含药血清对缺氧处理 12h 大鼠 PASMC 中 HIF-1α、PHDs 蛋白表达的影响 Western Blot 结果显示：与缺氧模型组相比：缺氧+FXD 组 HIF-1α 蛋白表达水平增 加（P ＜0.05），缺氧+FXD 组 PHD1 蛋白表达水平明显增加（P ＜0.01）。3.肺心汤含药血清对大鼠 PASMC 中 HIF-1α、PHDs mRNA 表达的影响RT-PCR结果显示：与缺氧模型组相比，缺氧+FXD 组和缺氧+西药组 PHD1 mRNA 表达升 高（P ＜0.05）。7.【结论】.肺心汤含药血清可抑制体外缺氧处理 24h 大鼠 PASMC 的增殖；.肺心汤含药血清能抑制缺氧处理 12h 大鼠 PASMC 中 HIF-1α 蛋白的表达，但能 提高 PHD1 蛋白和 mRNA 水平的表达；3.缺氧 12h 状态下，肺心汤含药血清可能通过 PHD1-HIF-1α 途径抑制大鼠 PASMC的增殖。【关键词】 肺心汤；含药血清；平滑肌细胞；PHDs；HIF-1α4Effect of Feixin decoction Drug-containing serum on influence of cell proliferation and expression of Hypoxia induciblefactor-Prolyl hydroxylase of Rat Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells upon Exposure to hypoxia in Vitro【Objective】:To investigate the effect of Feixin decoction(FXD) Drug-containingserum on PHDs-HIF-1α expression of Rat Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells(PASMCs) upon Exposure to hypoxia in Vitro,to explore the relationship with Feixin decoction containing serum and the proliferation of Rat PASMCs upon exp