[医学]测序和片段分析故障排除.pdf

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2018-02-09 发布于浙江
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[医学]测序和片段分析故障排除

DNA测序与片段分析故障排除 DNA测序和片段分析故障排除预防的要点成功的关键质粒测序模板: 引物= 200 ng : 3.2 pmol 保持BigDye的终浓度为1x PCR产物测序模板: 引物= 10 ng : 3.2 pmol 测序前一定要酒精沉淀纯化 2 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除提供线索的软件界面 3 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除电泳图谱（Electropherogram）窗口峰形是否正常有无杂带信噪比测序长度 4 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除原始数据（raw ）窗口平均信号高度：正常范围150-1500点；100说明测序反应失败峰有无变宽左右峰高是否均衡 5 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除信息（Annotation/information ）窗口 SeqAnalysis 3.7 (3100) SeqAnalysis 5.1 (3730) 6 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除仪器状态（EPT）窗口电流是否平稳：放电、气泡过高、过低：缓冲液、气温 7 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除引物的影响 8 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除引物合成缺陷合成时合成时部分引物多一个碱基部分引物少一个碱基 9 © 2006 Applied Biosystems DNA测序和片段分析故障排除模板上没有引物结合位点 10 ©