试验一DNA显示和细胞有丝分裂相的观察.DOCVIP

实验一 DNA显示和细胞有丝分裂相的观察 核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA主要分布在核的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有少量的RNA，核仁中也有少量的DNA。在线粒体，叶绿体等细胞器内除含有RNA外，也含有少量的DNA。 目的与要求 了解Feulgen反应的基本原理，学习其操作方法和压片法，初步掌握细胞分裂各期的主要特点。 原理 Feulgen反应的原理是根据DNA经弱酸（1mol/L）水解后，打开料嘌呤和脱氧核糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成有离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合，形成含醌基（ ）的化合物，醛基是一个发色团所以具有颜色，因此凡有DNA的部位，就呈现紫红色。 实验内容 DNA的显示法-Feulgen反应 压片法 细胞有丝分裂相的观察 实验步骤 DNA的显示法-Feulgen反应 以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行Feulgen反应的具体操作程序如下: 切取根尖 ↓ 长度0.3-0.5cm Camoy固定剂 ↓ 固定10-30分钟 95%酒精 ↓ 10分钟 70%酒精 ↓ 10分钟 蒸馏水 →(对照) 5%三氯醋酸 ↓ ↓90oC 15分钟 1mol/L HCl ← 蒸馏水 ↓ 室温 1mol/L HCl ↓ 60 oC 8分钟 Schiff试剂 ↓ 40 -60分钟 亚硫酸水(1,2,3) ↓ 换3次,每次5分钟 自来水 ↓ 将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料 蒸馏水 ↓ 压片 ↓ 镜检 (二) 压片法 压片的操作步骤如下,把根尖放在载片上,用刀片切取根尖(0.3cm),纵切根尖,加一滴水,用解剖针将根尖纵向分成若干小条,保留1-2小条,加盖玻片,用铅笔端轻轻敲击盖玻片,使细胞分离、压平呈云雾状。 蚕豆（或洋葱）根尖压片的观察 首先在低倍镜下，区分根尖的分生组织区及延长组织区的细胞，然后，在高倍镜下，观察细胞核的形态，注意在你的片子上，是否有有丝分裂细胞，如有，你能找到细胞分裂期的几个阶段，其特征如何？（可参照附录） 做Feulgen反应时，应注意的几个问题 固定剂的选择：一般常选用Carnoy固定液。其他的固定剂如Flemming固定剂及Champy固定剂等均可用，但不能使用Bouin固定剂。 水解时间：水解时间一定要合适，不宜过长或不足，否则会影响实验结果。如用Carnoy固定液固定的材料，水解时间一般在8－15分钟之间。水解时间的长短要随不同的材料及不同的固定剂而定。 Schiff试剂的质量：在做Feulgen反应时，一个重要的成功因素就是Schiff试剂的质量问题。实验时，要注意试剂颜色是否正常、有无SO2的气味。 洗涤剂的重要性：漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每次实验前临时配制，以便保持较浓的SO2。 实验对照组：一定要做对照片，以便说明实验结果的真实性。 操作过程中，用镊子镊取根尖的生长区部位，切勿夹取根冠部位。 鸦片过程中尽量使根尖分生组织细胞保持原来的分布状态。 习题 简述Feulgen反应的原理 欲得到一张好的Feulgen反应制片，制片过程中应注意些什么？ 绘制细胞分裂图。 附录：植物细胞分裂的几个时期。 细胞周期分为间期及分裂期，分裂期又称有丝分裂期。 按照有无核膜，核仁、染色体，以及染色体形态与分布位置的变化，把细胞有丝分裂又分为前期、中期、后期和末期四个阶段。现将各期特点简述如下， 前期：此期明显得变化是染色质螺旋盘绕成一定数目的细而长的染色丝，此即为染色体。染色体先是分散于核液中，以后，逐渐向核膜移动，在此时，核仁逐渐消失，核膜溶解。 中期：中期明显得特征是染色体进一步盘绕。变短变粗，在细胞的中央规则地排列成行，此即赤道板，若仔细观察，可以看到染色体两侧的纺锤丝。 后期：此期明显得特征是相同的两组染色体分别向细胞两极移动，染色体达到两极时染色体紧缩成团，染色体的轮廓逐渐变得不清楚，细胞质中间部位出现一个模板。 末期：末期的变化正好和初期相反，原来盘绕变粗的染色体又伸展开，故核内又呈现为比较均匀。此时，核仁、核膜又重新出现。 此外，间期细胞的细胞核有下述特点：核膜清楚，核内结构均匀，除异染色质外，可见1－2个着色较深的核仁。而在进入细胞分裂期的细胞核，一般均大于间期细胞核。 实验二 细胞器DNA的荧光显微观察 真核细胞内存在多种细胞器，如线粒体、质体、高尔基体、溶酶体和内质网。其中线粒体和质体携带自身的DNA。它们编码着线粒体和质体执行功能所必需的部分RNA，蛋白质并以特殊的方式遗传给子代。通常情况下线粒体和质