第二课 电镜技术PPT.pptVIP

电镜技术基本原理及其在临床病理诊断中的应用;形态学领域： 宏观形态结构 (肉眼＞ 0.2mm） (显）微观形态结构（光镜＜0.2mm, ＞0.2μm） 超微形态结构（电镜＜ 0.2μm ） ; 第一代：光学显微镜 （17世纪发明） (The German pathologist Virchow (1821-1902 AD) 第二代：电子显微镜（透射电镜1932年； 扫描电镜1942年） 第三代：扫描探针显微镜（1981年）。 ;绪 论;第一节 电子显微镜及 电子显微镜技术;基本显微技术; 电镜功能进展;光镜与电镜的比较;基本原理;第一节 透射电子显微镜技 术;超薄切片的基本操作程序;超薄切片的基本操作程序;扫描电镜标本制备的常规程序 1．取材，冲洗样品表面。 2．固定：3％戊二醛及1％丹宁酸处理30～60min。 3．冲洗：用双蒸水冲洗样品，洗去表面的固定液。 4．脱水：乙醇逐级脱水，脱好水的组织块浸泡在醋酸异戊酯里。 5．临界点干燥：将样品放人临界干燥装置中，按照临界点干燥的方法干燥样品。 6．用离子溅射镀膜仪给样品的镀上金属膜。 7．扫描电镜观察。; 扫描电镜冷冻断裂标本的制备程序 1．取材固定：取材按常规超薄切片技术的要求进行，组织块 的体积为lmm×4nun。用l％锇酸固定lh。用双蒸水冲洗数次。 2．二甲基亚砜浸泡：25％二甲基砜浸泡30min，50％二甲基 亚砜浸泡30min。 3．断裂：用液氮将50％二甲基亚砜连同组织一起冻成一个硬 块。用冷冻过的刀片将块断裂,也可在TF一1型冷冻割断装置 中进行。将组织块放人新配制的 50％二甲基亚砜里，然后 双蒸水冲洗数次。 4．软化和后固定：用0.1％锇酸软化组织12～72h，温度20 ℃ 。 然后用l％的锇酸固定1h。双蒸水浸洗1h，更换液体几次。 5．导电染色：2％丹宁酸2h，双蒸水冲洗1h，换液几次，然后 再用l％锇酸固定30～60min，双蒸水清洗1h。 6．脱水、干燥及镀膜，按常规方法进行。 7．扫描电镜观察。;免疫电镜技术操作程序;(二)包埋后胶体金法;电镜观察的优越性 ;电镜观察的局限性 ;动物学 植物学（微生物学） ----整体水平 细胞生物学 ----细胞水平 分子生物学 ----分子水平 总的趋势 ：从分子水平-------细胞水平 20世纪 21世纪;解放思想 刻苦钻研 精益求精;第二节、细胞超微结构;超微病理学 ( ultrastructural pathology );一、细胞膜及其特化物;4．纤毛(cilia) : 上皮细胞顶端伸出的能动的细长突起， 由细胞膜包绕微管复合结构，称为纤毛。其横剖面可见9+2微管结构，即中心2个单微管，周边9组双微管及臂。 ;5．细胞连接(cell junction) 在上皮组织细胞间或极少数间叶 组织细胞间可见细胞连接。连接可分为以下数种。 (1)桥粒(desmosome)：呈斑状，由细胞间高电子密度中线 和胞质面的附着板组成。广泛存在于鳞状上皮细胞 、 腺细胞或柱状细胞间。在上皮细胞基底面，细胞膜 与基板相邻处可见半桥粒 。 (2)中间连接（intermetiate)： 位于紧密连接下方的连续的 桥粒状粘着小带。 (3)紧密连接(tight junction)： 柱状上皮、腺上皮或内皮细 胞间，近腔侧相临细胞