[理学]2011shenghua第3章 核酸化学.ppt

二、核酸的两性性质及等电点 环境科学与工程系 与蛋白质相似，核酸分子中既含有酸性基团（磷酸基）也含有碱性基团（氨基），因而核酸也具有两性性质。 由于核酸分子中的磷酸是一个中等强度的酸，而碱性（氨基）是一个弱碱，所以核酸的等电点比较低。如DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。 RNA的等电点比DNA低的原因，是RNA分子中核糖基2′-OH通过氢键促进了磷酸基上质子的解离。DNA没有这种作用。 三、 核酸的紫外吸收 在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。 环境科学与工程系 四、核酸的水解 环境科学与工程系 1. 酸或碱水解 核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断。 DNA和RNA对酸或碱的耐受程度有很大差别。 例如，在0.1 mol/L NaOH溶液中，RNA几乎可以完全水解，生成2′-或3′-磷酸核苷；DNA在同样条件下则不受影响。这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的邻基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。 2. 酶水解 环境科学与工程系 磷酸二酯键 以DNA为底物的DNA水解酶（DNase） 以RNA为底物的RNA水解酶（RNase）。 根据作用方式又分作两类：核酸外切酶 核酸内切酶 在分子生物学研究中最有应用价值的是限制性核酸内切酶。这种酶可以特异性的水解核酸中某些特定碱基顺序部位。 五、核酸的变性、复性与杂交 环境科学与工程系 1. 核酸的变性 定义：核酸的变性是指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程。 实质：变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 主要因素：能够引起核酸变性的因素很多。温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的变性。 环境科学与工程系 RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。 利用紫外吸收的变化，可以检测核酸变性的情况。 例如:天然状态的DNA在完全变性后， 紫外吸收(260 nm)值增加25－40% 。 而RNA变性后，约增加1.1%。 核酸变性后，260nm的紫外吸收明显增加，这种现象称为增色效应。 热变性和Tm DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常把加热变性使DNA的双螺旋结构失去一半时的温度或紫外光吸收值达到最大值的50%的温度称为DNA的解链温度，又称熔解温度（melting temperature）或熔点，用Tm表示。 环境科学与工程系 一般DNA的Tm值在70-85?C之间。DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关。 G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G, C含量，可通过经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3) ×2.44 环境科学与工程系 DNA变性 环境科学与工程系 环境科学与工程系 当DNA的稀盐溶液加热到80-100℃时，双螺旋结构即发生解体，两条链彼此分开，形成无规线团。 DNA变性后，它的一系列性质也随之发生变化，如紫外吸收(260 nm)值升高, 粘度降低等。 2. DNA复性 环境科学与工程系 环境科学与工程系 变性核酸的互补链在适当的条件下重新缔合成双螺旋的过程称为复性（又称退火）。 复性后,核酸的紫外吸收降低,这种现象被称作减色效应. DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复。 DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。 将热变性的DNA骤然冷却时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性。 分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性也与它本身的组成和结构有关。 每个人的基因的差别只有万分之一，但每个人在特殊染色体位点的基因重复数目与家族关系密切，差异很大，亲子鉴定及基因指纹的依据就源于此。 基因指纹 亲子鉴定：准确率达99.99999%。 除了同卵孪生外，实际上没有两个人的DNA指纹图案是完全相同的 “万无一失”仍有失———DNA亲子鉴定险些拆散亲生母子（2006.6月多家媒体报道）  美国华盛顿 ：丽迪亚·菲切尔德：2002年发现 母子DNA不同 母子基因完全不符 幸福母亲突变嫌犯 再生孩子证明清白 不料又被怀疑代孕　 相似案例揭开