生物化学_protein_2.ppt

Classification size Composition 分类，大小，分子组成 Isoelectric Point (pI) Reaction of amino acids 1）氨基参加的反应 与HNO2的反应 与甲醛的反应 酰基化和烃基化反应 2）羧基参加的反应 成酯与成盐反应 酰氯化与酰胺化反应 3）氨基和羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应 形成肽键 4）侧链具有的反应 形成二硫键 成酯反应 酰基化反应 丹磺酰氯（dansyl chloride）是5-二甲基氨基萘-1-磺酰氯（5-dimethylaminonaphthalene-1 -sulfonyl chloride）的简称。丹磺酰氯与氨基酸反应生成荧光性质强和稳定的磺胺衍生物，用于多肽链NH3末端氨基酸的标记 烃基化反应 (2) 苯异硫氰酸酯（phenylisothiocyanate, PITC） 在弱碱性条件下，与氨基酸反应生成苯乙内酰硫脲（phenylthiohydantoin, PTH）衍生物，即PTH-氨基酸，此反应又称之Edman反应，该反应是蛋白质或多肽氨基酸序列测定常用的反应. 3）氨基和羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应 形成肽键 与茚三酮的反应 茚三酮在弱酸性溶液中与氨基酸共热，所有具有游离氨基的氨基酸都生成紫色化合物。 然而由于脯氨酸是一个亚氨基酸，所以与茚三酮反应生成的是黄色化合物。 与茚三酮的反应 Review Isoelectric Point (pI) Titration滴定 of an amino acid Gly幻灯片 18 His Lys Glu Reaction of amino acids Purification steps A cell contains many types of proteins In the lab we want to isolate a single protein for experiments Purification steps We first grow cells or isolate tissues that contain the protein of interest We break open the cells (lysis) to produce a crude extract Use centrifugation离心 to separate soluble from insoluble material We fractionate 分离 the protein mixture based on properties of such as size, charge affinity or solubility. Purification steps By using a combination of fractionation procedures a protein can be isolated from all other contaminating proteins in a cell. 多种分离方法结合可将某种蛋白质从混合物中分离出来。 This process is called protein purification. Fractionation by relative solubility根据相对溶解度分离 The solubility of proteins is increased at lower salt concentrations .This is called salting in.盐溶 The solubility of proteins is lowered at higher salt concentrations .This is called salting out.盐析 b.盐溶—盐析 等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 提问：原因？ 盐析 向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出 提问：原因？ ammonium sulfate (AS) precipitation硫酸铵沉淀法 The procedure of ammonium sulfate (AS) precipitation硫酸铵沉淀法 is used to separate proteins on the basis of their relative solubilities. 根据蛋白质不同的溶解度，采用硫酸铵沉淀程序来分离蛋白 As the amount of AS is increased, more proteins precipitate沉淀. ammonium sulfate (AS) precipitatio