生物技术概论细胞工程教程.ppt

培养方法——二步培养法 细胞生长与次生物质的产生对培养基与培养条件的要求不同，因而在细胞工厂化培养中采用二步培养方法，既使细胞生长快，又使次生物质代谢多。 第一步，促进细胞分裂，解决生物量生产问题； 第二步，促进次生代谢物合成，解决次生物质的积累问题。 在细胞指数生长停止期前后才更换培养基，有利于次生物质的积累。（一部分细胞用于提取物质，另一部分用于继续培养，进行下一个细胞周期） 培养方法—— 二步培养法 提高有用物质生产效率的技术因素 ①细胞株系生物合成能力 以特异的器官为材料 筛选生物合成能力强的细胞株 Wayner等用柠檬叶、鸡眼藤的培养物，经过筛选细胞株系，其次生代谢物是该植物完整植株的10倍。Zenk从长春花的培养物中，筛选出高产细胞株系，其生产根碱和阿玛碱的总量，比亲本植物高1.5倍，是亲本植物根含量的5倍。 ②培养基中添加前体 前体：有用次生代谢物的前驱物。 烟草愈伤组织培养中，将前体物质—烟碱酸加入，会增加烟碱的生成量。 （前体物质的加入时间非常重要，应注意。） ③培养基中生长调节剂（激素）的作用 植物生长调节剂不仅影响植物的脱分化与再分化，而且能影响次生代谢物质的产生。如烟草愈伤组织培养中，培养基中添加吲哚乙酸（IAA），能合成烟碱，而在含有2,4-D的培养基上，烟碱合成受阻。 提高有用物质生产效率的技术因素 ④培养条件的影响 光照、温度等影响次生代谢 在胡萝卜愈伤组织培养中，光照条件使紫红色愈伤组织能够生成大量的花箐苷，并且低温条件下，生成量高。 提高有用物质生产效率的技术因素 细胞大规模培养与有用物质的生产 生物碱 类黄酮类 萜类 菑体类 蛋白质和多肽类 ①生物碱 苦参的愈伤组织——苦参碱——降血压、扩张血管，治冠心病。 乌头愈伤组织——乌头碱——驱寒、散风、通经、止痛 长春花愈伤组织——长春花碱——治白血病高效药 喜树叶愈伤组织——喜树碱——抗肿瘤 黄连愈伤组织——小蘖碱 （黄连素的主要成分）——抗菌消炎 ② 萜类物质 利用人参愈伤组织培养生产皂苷已进入工厂化生产。紫杉醇 ③ 醌类物质 利用紫草、决明等愈伤组织培养，生产具有抗细菌活性的醌类物质。 ④ 蛋白质 商品胰岛素多数从动物的胰脏提取，但价格昂贵。从苦瓜离体培养物种可提取胰岛素。 SOD、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳酶 ⑤ 类黄酮类 ：银杏黄酮、花青素、查尔酮 ⑥菑体类：VD、激素、强心苷 若干有用物质的生产 存在问题 植物细胞培养生产有用物质尽管有种种优点，但与微生物培养比还存在许多问题。 生长速度较慢，通常完成一次生产周期需4~5周才能完成；而微生物的工业发酵只需几天就可完成发酵全过程。 植物细胞培养生产次生代谢物的总量一般比植物本身低，这主要是由于大多数离体培养细胞不能合成和积累所期望的化合物，当然也有些细胞株系产量高，这与微生物大不相同。 存在问题 生产技术上还存在一些问题。培养过程需要复杂的培养基及附加物，且易受细菌、真菌的污染；次生物的产量不甚稳定，成本较高等。 存在问题 2.3 植物非试管克隆技术 Technique of Efficient Rapid Non-tube Plant Cloning 该技术是基于一个集温度、湿度、光照、二氧化碳浓度、蒸发系数、营养液浓度等为一体的传感器（智能叶片），通过计算机控制系统为植物的离体材料创造最佳的生根环境，并采用无土栽培及技术，实现苗木快速繁殖的一项高新技术。 2 植物细胞工程 基本流程： 插床设置（苗床或营养袋）→铺设基质→插穗来源→插穗规格（硬枝或绿枝） 扦插专用药剂处理（药剂型号） →扦插生产周期安排→插后智能叶片管理(T、R、光照、杀菌、补充营养液) →育苗生根成活→炼苗移栽→定植大田或苗圃继续培养 非试管繁殖与组培的区别 非试管繁殖 组培 培养地点 试管内 大田内 成活率 移栽成活率低 移栽成活率高 成本 投入成本高 投入成本低 操作 操作复杂 操作简易 品种范围 快繁品种范围窄 繁品种范围广 非试管繁殖与传统营养繁殖的区别 非试管繁殖 传统营养繁殖 季节限制 不受季节限制 受季节限制 集约化程度 土地使用率高，有高度的集约化与规模化 土地使用率低，集约化与规模化不高 品种限制 品种限制不大， 传统扦插品种限制大 插穗需求量 对插穗需求量小 传统扦插对插穗需求量大 操作管理与劳动投入 有优势 无优势 根系 发达，成活率高 不发达，成活率较低 智能叶片 智能模拟计算机 豆腐菜