微生物学检验细菌的生物化学实验方法培训.pptVIP

培养特性 生长条件 需氧、兼性厌氧 营养要求不高，普通培养基上生长良好 耐盐，10～15％NaCl上能生长 培养特性 生长现象 液体培养基：均匀混浊、少许沉淀 固体培养基：中等大小菌落、圆形、凸起、边缘整齐、光滑、湿润的S型菌落 常用培养基及菌落特征 血平板（营养培养基）： 中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素、透明溶血环（致病葡萄球菌） 高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）： 淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌） 卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养基）： 菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌） 生化反应 触酶试验：+ 葡萄糖氧化发酵试验：发酵+ 甘露醇分解试验：+（致病菌株） 抗原构造 ★葡萄球菌A蛋白（SPA） 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性结合，应用于协同凝集试验 抵抗吞噬细胞的吞噬 ★多糖抗原 具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊断 分类和分型 葡萄球菌包括32种及亚种 根据产生色素的不同分类 根据产生凝固酶与否进行分类 按噬菌体分型法分类 葡萄球菌传统分类 金黄色 葡萄球菌 表皮 葡萄球菌 腐生 葡萄球菌 产生溶血毒素 + － － 产生凝固酶 + － － 产生耐热DNA酶 + － － 产生SPA + － － 新生霉素敏感性 S S R 致病性 强 弱 无 金葡菌噬菌体分型 分型：分五个群，共22型 意义：追踪传染源 抵抗力 是抵抗力最强的无芽孢细菌 耐干燥 对龙胆紫敏感 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已成为医院感染最常见的致病菌 致病物质 凝固酶 葡萄球菌溶素 杀白细胞素 肠毒素 剥脱毒素 毒性休克综合征毒素－1 凝固酶 游离凝固酶：采用试管法检测 结合凝固酶：采用玻片法检测 金葡菌凝固酶试验均为阳性 凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志 游离凝固酶 协同因子 凝血酶 纤维蛋白原 纤维蛋白 血浆凝固 结合凝固酶（位于菌体表面） 纤维蛋白原 纤维蛋白 细菌凝集 所致疾病 侵袭性疾病 化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎、脑膜炎、败血症等 毒素性疾病： 食物中毒、假膜性肠炎等 常用细菌生化反应试验 糖醇类代谢试验 糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） 七叶苷水解试验 Β－半乳糖苷渗透酶试验 伏－普试验（V-P试验） 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌 葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 甲基红试验 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 V-P试剂 培养基变红 V－P试验 脱酸 葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径 葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 乙酰甲基甲醇 二乙酰 V-P试剂 培养基变红 脱酸 蛋白质类代谢试验 靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨试验 尿素酶试验 靛基质试验 原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 培养基：蛋白胨水 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） 结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： － 应用：用于肠道杆菌的鉴定 靛基质试验原理 色氨酸酶 色氨酸 靛基质 （吲哚） 玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚） 对二甲基氨基苯甲醛 尿素酶试验 原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+ 培养基不变色－ 应用：肠杆菌科属间鉴定 尿素酶试验原理 尿素 尿素酶 氨+CO2 培养基pH升高 酚红呈碱性变色 枸橼酸盐利用试验 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。 培养基：枸盐酸盐培养基 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色） 结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：－ 应用：肠杆菌科属间鉴别 枸橼酸盐利用试验原理 枸橼酸盐 铵盐 碳酸盐 氨 培养基pH下降 溴麝香草酚蓝 呈碱性变色 培养基变蓝 培