液相色谱基础教材教学稿件.pptVIP

液相色谱基础知识;液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析 流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用 气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法 适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析 流动相只起运载样品分子的能力 ; 液相色谱基础知识;溶 剂 等 级;水 / 甲醇梯度 ODS 柱;溶 剂 等 级;;General Maintenance and Troubleshooting;过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小物理颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是在使用无机盐配制的缓冲液的时候必须过滤 脱气：除去在流动相中溶解或彼此混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 无在线脱气应注意： 1）每天脱气 2）如使用氦脱气，对混合溶剂脱气时间不能过长;液相色谱基础知识;梯度洗脱形式的选择;液相色谱基础知识;使用适宜的流动相溶解样品 在溶剂选择的时候，应注意以下原则： -- 减少溶剂峰，尤其是不可使用组分峰靠近溶剂峰 的流动相 -- 保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在色谱柱中产生沉淀 2. 进样前最好使用0.45um 的膜进行过滤 如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤;进样器;进样量和检测器响应的关系示意图;手动进样器的原理图;交叉污染的原因;手动进样法;手动进样法;柱温箱;柱压低于150 kgf/cm2 柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃ 缓冲液PH使用范围为2～7 ; 液相色谱基础知识;分 析 柱 的 维 护;症状：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间的改变 延长柱寿命方法： 修补柱头 换过滤片 倒冲柱;常用检测器;原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：比耳定律，A＝KCL 优点： 1）灵敏度高 2）对温度和流速不敏感 3）可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 ;;二极管阵列检测器（SPD－M10AVP） -- 二十一世纪标准紫外检测器 色谱定性依据： 保留时间 常规紫外检测器 峰纯度 二极管阵列检测器; ;1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰;原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）;原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。 优点：通用型检测器， 缺点： 1）对温度变化敏感 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度洗脱 3）属于中等灵敏度的检测器;液相色谱基础知识;原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%) 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子