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基 因 工 程 （GENETIC ENGINEERING）; 基 因 工 程 （GENETIC ENGINEERING）;细胞克隆（cell clone）;个体克隆（Organism cloning ）; 分子克隆(molecular cloning); 克隆技术的应用前景; ; ;（一）限制酶的定义; 2、限制酶命名的原则; ;（四）Ⅱ型限制酶的特性;
Sau3AI EcoRI PstⅠ HgaⅠ
5 ′GATC GAATTC CTGCAG GACGC 3′
3′ CTAG CTTAAG GACGTC CTGCG 5′
;3、识别序列大多为二重对称： 具有回文结构（palindrom）。
Sau3AI EcoRI PstⅠ SmaⅠ
5 ′GATC GAATTC CTGCAG CCCGGG 3′
3′ CTAG CTTAAG GACGTC GGGCCC 5′
;4、多数限制酶的切割位点就在识别位点内，但少数限制酶的切割位点不在识别位点内，而在识别位点的旁侧。如HgaⅠ的识别位点是GACGC（5/10），切割位点在两条DNA链上分别在距识别位点5个和10个核苷酸处。
Sau3AI EcoRI PstⅠ HgaⅠ
5 ′GATC GAATTC CTGCAG GACGC 3′
3′ CTAG CTTAAG GACGTC CTGCG 5′
;5、有的识别序列中存在简并序列（有的核苷酸位点可以不同 ）。
简并序列： GTYRAC
Y=C/T
R=G/A
YR=CG/CA/TG/TA
∴ HindⅡ可识别4个特定序列 ;6、限制酶的切割方式有两种：;7、限制酶的切割产生三种不同末端;; 8、同功异源酶（isoschizomers）;9、同尾（裂）酶
有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后，产生相同类型的粘性末端。;10、限制酶易失活，需注意酶活力的保存。;二、DNA连接酶; T4 DNA连接酶（T4 DNA Ligase） ; ; 1.依赖DNA的DNA聚合酶(DNA Polymerase) ; ; ; (3)耐热DNA聚合酶：在PCR反应中，DNA聚合酶是最关键的因素之一。PCR发明的初期使用的DNA聚合酶是Klenow片段、T4DNA聚合酶和T7DNA聚合酶，它们因对热的稳定性差而未得到广泛应用。直到耐热的DNA聚合酶(Taq DNA polymerase) 应用于PCR反应，才使这一技术得到迅速发展和广泛应用。
;1）TaqDNA聚合酶
Taq DNA聚合酶在75-80℃具有最高的聚合酶活性。75-80℃每个酶分子每秒可延伸约150个核苷酸，70℃时延伸速度在60个核苷酸/秒以上。55℃时为22个核苷酸/秒；37℃和22℃时分别为1.5个和0.25个核苷酸/秒。温度超过80℃时，合成速度明显下降，可能与引物和模板结合稳定性遭到破坏有关。
;Taq DNA聚合酶没有3′→5′外切酶活性。没有校正功能的。
Taq DNA聚合酶具有类似未端转移酶的功能，能催化dNTP加到DNA的3′-OH端。;2）Tth DNA聚合酶;3）Vent DNA聚合酶;4）Pfu DN
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