[医药卫生]14DNA的复制与转录.ppt

DNA的复制与转录 DNA的复制过程 中心法则 中心法则的主要内容 中心法则的补充和再思考 逆转录 RNA模板 蛋白质的自身构象调控 DNA的半保留复制 实验证据 15N标记DNA的复制 正在复制的DNA观察 半保留复制的定义 DNA复制过程中，双链解开成两条单链，然后分别以两条单链为模板在DNA聚合酶催化下，合成两条与模板互补的单链，新合成单链与模板链相互配对形成DNA双螺旋分子，子代DNA含有一条亲代DNA链和一条新合成链，称半保留复制 DNA复制的起始和复制方向 复制子 基因组中独立进行复制的最小单位，称复制子 一个复制子应包含复制起点、复制终点 复制起点 DNA上的特定序列，一般含较多的A/T对，反向重复，具有进化保守性 有特殊的蛋白质识别起始序列 一般原核生物只有一个复制起点，而真核生物的染色体有多个复制起点 对于原核生物的质粒，复制起点的性质与其拷贝数相关 复制方向 大多数生物的复制是双向的，接近对称的 现在认为应该存在复制终点 DNA复制的一般过程 DNA双螺旋的打开 拓扑异构酶解除DNA的超螺旋 拓扑异构酶I，断裂并重连接一条DNA单链，不消耗ATP 拓扑异构酶II，断裂并重连接两条DNA单链，在引入超螺旋时耗能 DNA解旋酶将DNA双链打开 每解开1对碱基需要水解2ATP 解旋酶的ATP酶活性必须有DNA单链的存在 转录激活作用 在复制开始前由RNA聚合酶，合成一小段RNA分子 作用主要在于分离DNA双链 少数情况，这段分子可以加成后形成复制引物（ColE质粒） 单链DNA与单链结合蛋白（SSB）作用，避免重新闭合或酶解 不能帮助解旋 原核SSB有协同效应，真核一般没有 DNA复制的引发 参与复制引发体形成的蛋白因子 DNA解链所需的因子（前述） i 蛋白、n、n’、n’’蛋白 dnaB、dnaC蛋白 引发酶（引物合成酶） 引发过程 n、n’、n’’蛋白与DNA单链结合 dnaB与6个dnaC组成复合体 复合体通过 i 蛋白与n、n’、n’’蛋白组成引发前体 引发前体与引发酶组成引发体 引发体沿模板链5’? 3’ 移动 移动到一定位置，即开始合成RNA引物，一般几个到十几个核苷酸，合成方向也是5’? 3’ 随着复制体的移动，新的DNA双链产生，形成复制叉结构，双向复制的复制叉，形成大致对称的结构。 DNA的半不连续复制 新生成DNA的合成方向始终是5’?3’的，DNA的双链却是反向平行的，这就产生了其中一条DNA单链的复制方向与复制叉移动方向相反的问题 实验证明：复制方向与复制叉移动方向相反的DNA单链，并不是连续合成的，而是先形成一些小的、不连续的DNA片断，再通过DNA连接酶连接起来。这些片断称为冈崎片断，这样的复制方式称为半不连续复制。 连续合成的DNA链一般称前导链，不连续合成的DNA链称滞后链。 冈崎片断产生的原因 引发体先在前导链上合成一段引物，后转移到滞后链 复制叉移动一段距离后，在滞后链模板上的引物酶合成出引物，DNA聚合酶结合，开始延伸DNA，由于方向与复制叉移动方向相反，延伸一段距离后， DNA聚合酶与DNA分离。 由于复制叉不断移动，滞后链不断合成引物，上述过程不断重复，形成冈崎片断 原核冈崎片断一般1000~2000bp、真核冈崎片断一般100-200bp DNA聚合酶 大肠杆菌一般有3种DNA聚合酶，分别称为DNA聚合酶I、II、III，分别行使不同的功能，DNA的复制主要由DNA聚合酶III催化 DNA聚合酶I：多功能酶，需Mg2+、Zn2+ 5’? 3’核苷酸聚合作用，以四种脱氧核苷三磷酸为原料，需要单链模板，必须有引物游离3’-OH存在 3’ ? 5’核酸外切酶作用， 校对作用。 3’ ? 5’焦磷酸解作用 5’? 3’核酸外切酶作用。切除引物、损伤修复 磷酸盐与焦磷酸基的交换 DNA聚合酶III 7种亚基构成全酶 功能与DNA聚合酶I相似，但活性更高 ?亚基为催化亚基，?亚基具有校对功能，?、 ?、?构成核心酶 ?亚基为引物识别和模板定位亚基，全酶结合后释放 ?亚基使酶可以利用长的DNA单链 ?、?亚基称为延长因子 DNA聚合酶II 没有5’? 3’核酸外切酶作用 其他参与DNA复制的酶 DNA连接酶：催化相邻的核苷酸之间3’，5’磷酸二酯键的形成，以NADH或ATP供能 尿嘧啶糖苷酶、dUTP酶、AP核酸内切酶 DNA复制的准确性的保障 DNA聚合酶的校对作用 引物的切除和空缺修补 未配对单链的切除 真核DNA复制与原核的对比 五种DNA聚合酶：?、?、?、?、?。 ?相当于原核的聚合酶III, ?在DNA的延伸中起作用。 核小体的“全保留复制”：前导链保有全部的原核小体，滞后链则全部重新合成 末端问题：端粒 其他DNA复制方式 滚环复制：单向复制的一种特殊形式 单链开