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兽医微生物与免疫 实验五 细菌的分离、移植 及培养性状的观察 一、目的要求 1、练习和掌握细菌的分离培养、纯化、移植的基本操作技能。 2、掌握无菌操作技能 。 3、了解细菌在培养基上的生长特性。 二、器材 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、麦康凯培养基、接种环、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱等。 补充：（一）接种工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 （二）、无菌操作 防止微生物进入机体或其它物品的操作技术。 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程是无菌接种操作。 实验台面一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。 在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 三、实验内容 1、平板培养基的制备 2、平板划线分离 3、斜面接种法 4、液体接种法 5、细菌生长特性观察 1、平板培养基的制备 15稀释平板测数法（混融法和涂布法）.wmv 2、平板划线分离（16平板划线.wmv） （1）右手持接种环，将接种环直立灭菌，再横向持棒烧金属柄部分，通过火焰 3-4 次； （2）无菌取样：用接种取斜面培养物或取液体材料、肉汤培养物一环； （3）接种培养平板时以左手掌托平皿，拇指和食指将平皿盖揭开成 20 o ~30 o（角度越小越好，以免空气中的细菌进入平皿中将培养基污染）； （4）将所取材料涂布于平板培养基边缘，然后将多余的细菌在火焰上烧灼，待接种环冷却后再与所涂细菌轻轻接触开始划线； （5）划线时尽量与培养基表面平行，防止划破培养基，划线时不要过多重复，以免形成菌苔，不能得到单个菌落。 划线接种方法如下图： 3、斜面接种 (1)接种环灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 19无菌操作接种技术（斜面接种等）.wmv （1）两试管斜面移植时，左手斜持菌种管和被接种琼脂斜面管，管口互相并齐，管底部放在拇指和食指之间
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