实验六_细菌的生理生化试验课件演示.pptVIP

实验六 细菌的生理生化试验; 一、? 目的 1、??了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理 。2?、?掌握细菌生理生化试验的方法。 ;二、原理;三?、?材料; 3??试剂?  5%的α-萘酚溶液、 40％KOH溶液、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚。 4??器具  超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、接种环等。 ;四、??流程 ;五、??步骤 ; 2?原理  可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察是否产生气泡来判断。 ;3?材料 3.2　菌种  大肠埃希氏菌（Escherichia?coli）、产气肠杆菌（Enterobacter?aerogenes）、沙门氏菌的斜面菌种 3.３　培养基  葡萄糖和乳糖发酵培养液试管 ;４??流程 发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录 ;5??步骤?????????????????????? 5.1??试管标记??????????????????????????????????? ???? 取分别装有葡萄糖和乳糖发酵培养液试管各?4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、沙门氏菌和空白对照。? ; 5.2??接种　　　　　　　　　　　　　?  以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h观察结果。 ;(二)、乙酰甲基甲醇试验(V．P试验) ? 1.目的  检测细菌能否利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法。;2?原理;3?材料;４?流程; 5?步骤 ;（2）、??接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养48～72h。 ;（3??）、观察记录 取出以上试管，先加甲液（6%的α-萘酚溶液）0.5毫升,再加乙液（40％KOH溶液）0.5毫升,充分混匀,静置15min后，若培养液呈红色者，记录为V.P.试验阳性反应（用“＋”表示）；若不呈红色，记录为V.P.试验阴性反应（用“－”表示）。1小时后可出现假阳性。 ;Date;（三）?甲基红试验（M.R.试验）; 2、?原理 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。 ;3?、材料  （1?）、菌种 大肠埃希氏菌（Escherichia?coli）、产气肠杆菌、沙门氏菌的斜面菌种 （2?）、培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基;4??流程 培养液试管→标记→接种→培养→指示剂→观察→记录; （1?）、?标记试管 取4支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、沙门氏菌和空白对照。;（2）、??接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养48～72h。 ;（3??）、观察记录 取出以上试管，各加入5～6滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。 注意：甲基红指示剂不能加太多，以免出现假阳性。; 甲基红（Methyl Red）试验结果;;（四）、靛基质（吲哚）试验 ; 2?、原理 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红色的玫瑰吲哚。;3、?材料  3.1　菌种 大肠杆菌、产气肠杆菌、沙门氏菌 3.2 培养基 蛋白胨水培养基 3.3　试剂 对二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。? ;4　流程  标记试管→接种→培养→观察→记录　 ;5　步骤 （1?）、?标记试管 取4支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、沙门氏菌和空白对照。  ;（2）、??接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养48