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8 色谱分离技术 易庆平 QQ知识目标 色谱法的概念、特点和分类 吸附色谱（第7章已有涉及） 分配色谱 离子交换层析 凝胶色谱 纸色谱和薄层色谱 高效液相色谱 气相色谱 亲和色谱、疏水色谱、共价色谱 0 概述 概念：也叫称色层法、层析法等，是利用混合物中各组分的物理化学性质的差异，各组分以不同程度分布在固定相和流动相中，使各组分以不同速度移动，从而达到分离。 色谱法首创于1903年，是俄国植物学家茨维特首次成功地用于植物色素的分离。将色素溶液流经装有吸附剂的柱子，结果在柱的不同高度显出各种色带，而使色素混合物得到分离。色层分析由此而得名。 “层析（色谱）的本质是使一种液体均匀地渗过一个相当细碎的物质的柱体，这些物质通过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。” ——马丁（A. J. P. Martin）（英） 色层分离法是一组相关分离方法的总称，它的机理是多种多样的，但不管哪种方法都必须包括两个相。一相是固定相，通常为表面积很大的或多孔性固体；另一相是流动相，是液体或气体。当流动相流过固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离，或者说，易分配于固定相的物质移动速度慢，易分配于流动相中的物质移动速度快，因而得到逐步分离。 固定相：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。 流动相：色谱过程中推动固定相上的物质向一定方向移动，携带待测组分向前移动的物质。 （9）色谱流出曲线的意义 色谱峰数等于样品中单组分的最少个数；色谱保留值是定性分析的依据；色谱峰高或面积是定量分析的依据；色谱保留值或区域宽度是色谱柱分离效能的评价指标；色谱峰间距是固定相或流动相选择是否合适的判定依据。 层析分离分类（1） 按溶质分子与固定相相互作用机理 吸附层析（范德华力，氢键，静电力，共价力） 分配层析（溶质在两液相间分配系数不同） 凝胶过滤（分子大小与形状） 实验技术分类 低压（小于0.5 Mpa) 中压 (0.5-5 Mpa) 高压 (5-40 Mpa) 层析分离分类（2） ⑴分析色谱（10mg） ⑵半制备色谱(10-50mg) ⑶制备色谱(0.1-1g) ⑷工业生产规模色谱(20g/d) 年产10g合格的重组人粒细胞集落刺激因子（rhGcs-F），其产值高达1亿元。 层析分离分类（3） 根据固定相形状分类 柱层析 纸层析 薄层层析 根据流动相分类 气相层析 液相层析 超临界流体层析 按操作方式分类（展开） 迎头法（frontal analysis) 顶替法 （displacement analysis) 洗脱分析（elution analysis) 特点和应用 特点：分离效率高、应用范围广、选择性强、设备简单、操作方便 （1） 纯化倍数高 （2） 操作规模小，放大困难 （3）?最终产品纯化 （4） 适用于价格昂贵的产品 应用：分离制备、分析检测 8.1 吸附色谱法 应用最早的色谱， 1903年 关键是选择吸附剂和展开剂。 原理及常用吸附剂见第7章 吸附色谱操作方法（重点） 1.色谱柱、吸附剂和洗脱剂的选择 2.基本操作过程 8.2 分配色谱法 定义：靠溶质在固定相（固定在层析柱内的液体）和流动相之间的分配系数不同而分离的色谱方法，包括固定相、流动相和载体等。 分配系数：溶质在固定相与流动相浓度比值 载体：本身不起分离作用，没有吸附能力，用来使固定相停留在柱内的一种惰性材料 。 常见的载体有：硅胶、滤纸、硅藻土、纤维素等 固定相：通常选取各组分溶解度大的溶剂作为固定相。流动相可以是极性的（反相色谱法），也可以是非极性的（正相色谱）。 正向色谱：以水或极性强的有机溶剂作固定相，极性弱的有机溶剂为流动相。（固定相的极性大于流动相） 反向色谱：以有机溶剂作为固定相，以水或水溶液混合的有机溶剂作为流动相。（固定相的极性小于流动相） 纸色谱通常是一种分配色谱。（详见P147） 纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相 属于正相分配色谱 依据分配系数的不同而达到分离 8.3 离子交换色谱法（重点掌握） 用具有离子交换性能的离子交换剂作为固定相，选择合适的溶剂作为流动相，使溶质按照其离子交换能力的不同而得到分离的方法。 8.3.1 离子交换色谱法的基本原理 交换树脂的结构：骨架（基质） －带电功能基团－自由活性离子（反离子） 离子交换剂是一种带有功能基的网状高聚物电解质。 　一是高聚大分子骨架，它具有空间网状立体结构。 　二是连接在骨架上的功能基。 　三是功能基上所带电荷相反的可交换离子。(可移动） 强酸型阳离子交换树脂分离示例 8.3.2 离子交换色谱介质 应满足以下基本条件： 高度的不溶性 疏松的多孔