氟菌唑检测方法分析目标化合物氟菌唑氟菌唑代谢物〔氯-ααα.PDF

氟菌唑检测方法 1．分析目标化合物 氟菌唑、氟菌唑代謝物〔4-氯- α,α,α-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o- 甲苯胺〕 2．仪器设备 带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪。 3．试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 柱色谱用合成硅酸镁：粒径150～250μm，在130℃加热12小时以上，转移到干燥器 中冷却。加入5％的水。 0.01mol／L碳酸盐缓冲液：在0.8mL 0.2mol／L碳酸钠溶液与9.2mL 0.2mol/L碳酸氢 钠溶液中加水至200mL。 氟菌唑和4-氯- α,α,α-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺的标准溶 液：将10mg氟菌唑和10mg及4-氯- α,α,α-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o- 甲苯胺溶解在乙腈中，至100mL。 0.05mol／L磷酸缓冲溶液：在55.4mL 0.5mol／L磷酸二氢钾溶液和48.2mL 0.5mol ／L磷酸氢二钠溶液中，加水至1000mL(pH6.8)。 4．标准品 氟菌唑：含氟菌唑99％以上，熔点为63.5℃。 4-氯- α,α,α-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺：含4-氯- α,α, α-三氟- N-(1-氨基-2-丙氧基亚乙基)-o-甲苯胺98％以上。 5．试验溶液的制备 a 提取方法 ① 谷类和种子类 将样品粉碎，过420μm标准网筛后，称取其20.0g，加入40mL水，放置2小时。 加入100mL甲醇，用振荡器激烈振荡30分钟后，静置，用涂布1cm厚硅藻土的滤 纸抽滤，滤液转移到500mL分液漏斗中。取出滤纸上的残留物，加入50mL甲醇，用振 荡器激烈振荡30分钟后，按上述同样操作，合并滤液于上述500mL分液漏斗中。 加入200mL 5％氯化钠溶液和100mL二氯甲烷(特级)，用振荡器激烈振荡5分钟 后，静置，二氯甲烷层移入300mL三角瓶中。水层中加入100mL二氯甲烷(特级)，按 上述同样操作，合并二氯甲烷层于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时摇动、 混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩器中。再用20mL二氯甲烷(特级)洗涤三角 瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，合并洗液到减压浓缩器中。40℃以下除去二氯 甲烷。残留物中加入5mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液溶解。 ② 水果、蔬菜和末茶 水果和蔬菜：准确称取约1kg，必要时定量加入适量水，搅碎混和均匀后，称取 相当于20.0g样品的量，加入20mL 0.05mol／L磷酸盐缓冲液。 茶末：称取20.0g样品，加入20mL 0.05mol／L磷酸盐缓冲液。 加入100mL甲醇，用振荡器激烈振荡30分钟后，静置，用涂布1cm厚硅藻土的滤 纸抽滤，滤液转移到500mL分液漏斗中。取出滤纸上的残留物，加入50mL甲醇，用振 荡器激烈振荡30分钟后，按上述同样操作，合并滤液到上述500mL分液漏斗中。测定 滤液的pH，如果偏酸性，则用0.1mol／L的氢氧化钠溶液调整到pH7左右。 加入200mL 5％氯化钠溶液和100mL二氯甲烷(特级)，用振荡器激烈振荡5分钟 后，静置，二氯甲烷层移入300mL三角瓶中。水层中加入100mL二氯甲烷(特级)，按 上述同样操作，合并二氯甲烷层于上述三角瓶中。加适量无水硫酸钠，不时振摇、 混合，放置15分钟后，滤入于磨口减压浓缩器中。再用20mL二氯甲烷(特级)洗涤三 角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，合并洗液于减压浓缩器中。40℃以下除去二 氯甲烷。残留物中加入5mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液溶解。 ③ 末茶以外的茶 将4.00g样品浸泡在240mL 100℃的水中，室温下放置5分钟后，过滤。 十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(360mg)中注入5mL乙腈和5mL水，弃去流出液。柱 中注入30mL上述滤液后，注入10mL水， 10mL乙腈：水(3：7)混合溶液，弃去流出液。 接着注入5mL乙腈：水(4：1)混合溶液，收集流出液，此为试验溶液(必要时按b 净 化方法进行净化。)。 b 净化方法 在内径15mm，长300mm的色谱管中注入10g悬浮在丙酮：正己烷(1：19)混合溶液 中的柱色谱用合成硅酸镁，其上端再填入约5g无水硫酸钠，放出丙酮：正己烷(1： 19)混合容液至柱上端留有少量丙