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实验29 蛙类心博观察及 离体蛙心灌流 [目的要求] 1.观察蛙心起搏点和蛙心脏不同部位的自律性，加深对心脏自动节律性、正常起搏点和潜在起搏点的理解； 2.观察细胞外液钾离子、钙离子以及去甲肾上腺素、乙酰胆碱等神经递质对心脏活动的影响，理解内环境理化因素相对稳定对维持心脏正常节律性活动的重要意义。 3.学习离体蛙心灌流，了解离体器官的研究方法。 基础知识 心肌自动按一定节律发生兴奋的能力——自律性(autorhythmicity) 指标：自动兴奋的频率 除房室结的结区外，特殊传导系统的细胞均有自律性。 对于人类，以窦房结P细胞的自律性最高，是心脏兴奋的正常开始部位。两栖类动物的心脏正常起搏点为静脉窦。 [实验器材] 1.药品与器材 常用蛙类手术器械、毁髓针，蛙钉、滴管、丝线、蛙板、培养皿、大瓷盘、斯氏蛙心套管、蛙心夹、长细滴管、铁支架、任氏液（共用）、计算机生物信号采集处理系统。0.65%NaCl、2%CaCl2、2.5%NaHCO3、3%乳酸、1%KCl、1：10000去甲肾上腺素（升压） 、1：100000乙酰胆碱、1：1000普萘洛尔、1：2000阿托品。 25％氨基甲酸乙酯（麻醉）， 5%肝素（抗凝） 2.实验对象 蟾蜍或蛙。 [方法步骤] 1.破坏脑脊髓 。 2. 仰卧位固定于蛙板上。 3.打开胸腔暴露心脏 ，观察心脏的结构 。 4. 斯氏结扎，记录结果。 两栖类动物的心脏为两心房、一心室，心脏的起搏点是静脉窦。静脉窦的自动节律最高，心房次之，心室最低。正常情况下，心脏的活动节律服从静脉窦的节律，其活动顺序为：静脉窦、心房、心室。 [蛙心灌流方法步骤] 4. 在左主A干下再穿一条线A圆锥根部剪口，将A插管插入心室腔内 注意： ① 固定换能器时，应稍向下倾斜，以免从心脏滴下的水流入换能器内 ② 随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润 启动PCLAB-UE系统 实验项目—循环系统实验 --蛙心灌流 5. l：10000 E E与心肌β1受体结合 6. l：10,000乙酰胆碱 [思考题] * 自律性 [实验结果及理论分析] 第二扎 第一扎 对照 心室 心房 静脉窦 斯氏结扎记录表（次/分钟） 窦房沟 一、离体心制备 1.破坏脑和脊髓，打开胸腔，暴露心脏 （背面） （腹面） 2.暴露出心脏，识别静脉窦、心房和心室。 3. 在左主A干下穿一条线 （背面） （腹面） 5. 固定插管 6. 摘出心脏， 二. 连接实验装置 换能器 三. 观察项目 （一）描记正常心搏曲线 曲线的幅度 —— 心脏收缩的强弱 曲线的疏密 —— 心率的快慢 曲线的规律性—— 心跳的节律性 曲线的基线 —— 心室舒张的程度 ㈡. 观察项目 顺序 观察项目 药量 心肌收缩力 任氏液 灌流 0.65%NaCl 灌流 3 3%CaCl2 1~2滴 4 1%KCl 1~2 滴 5 1:10000 E 1~2 滴 6 1:10000 ACh 1 滴 7 3% 乳酸 1 滴 8 2.5% NaHCO3 2~4 滴 顺序 观察项目 药量 心肌收缩力 任氏液 灌流 正常 0.65%NaCl 灌流 减弱 3 3%CaCl2 1~2滴 增强，舒张不完全 4 1%KCl 1~2 滴 减弱 5 1:10000 E 1~2 滴 增强 6 1:10000 ACh 1 滴 减弱 7 3% 乳酸 1 滴 减弱 8 2.5% NaHCO3 2~4 滴 恢复正常 【实验结果】 换能器 *【注意事项】 1）当每种化学药物作用已明显时，应立即将蛙心插管内液体吸出而换上任氏液